巨大口蘑内参基因的筛选  

Reference Gene Selection for Real-time Quantitative PCR in Tricholoma giganteum

作　　者：刘英[1] 喻晓明 蔡佺佑 吴英 姜子德[2] 莫美华[1] 

机构地区：[1]华南农业大学食品学院,广东广州510642 [2]华南农业大学农学院,广东广州510642

出　　处：《食用菌学报》2017年第4期12-18,共7页Acta Edulis Fungi

基　　金：国家自然基金项目(31272218);广东省科技计划项目(2015A020209144);广东省科技计划项目(2013B020502019);广州市2017年产学研协同创新重大专项(201704020020);广州市应用基础研究专项项目(2012J4100125)资助

摘　　要：根据巨大口蘑(Tricholoma giganteum)转录组测序组装结果,选取6个组成型表达基因(β微管蛋白基因β-tubulin、肌动蛋白基因act、核糖体蛋白基因60S、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原酶基因ND、RNA聚合酶Ⅱ基因rpb2、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因gapdh)为候选内参基因,结合geNorm、NormFinder以及BestKeeper软件与实时荧光定量PCR技术,对巨大口蘑各候选内参基因在不同生长阶段(Ⅰ组)、不同组织(Ⅱ组)以及不同亚铁离子浓度胁迫条件下(Ⅲ组)的表达稳定性进行分析。结果表明:β-tubulin基因在供试条件下的相对表达量较稳定,可作为巨大口蘑功能基因转录水平分析的内参基因。Based on transcriptome analysis result of Tricholoma giganteum, six candidate reference genes for T. giganteum [（β-tubulin protein gene （β-tubulin）, alpha-actin protein gene （α-actin）, 60S ribosome gene （60S）, reduced nicotinamide adenine dinucleotide gene （ND）, RNA polymerase II gene （rpb2）and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene （gapdh） ]were examined for expression stability using three statistical algorithms （geNorm, NormFinder and Bestkeeper）. Highest expression stability was recorded for β- tubulin across all the T. giganteum samples tested, which comprised of material from different developmental stages （vegetative mycelium, young and mature fruit bodies）, different tissue samples （vegetative mycelium, mature stipes and mature pileD, and samples of mature pilei immersed in 0, 10, 20 and 30 mmol/L FeSO4 for 30 min. It is recommended that β-tubulin be adopted as the reference gene when normalizing target genes in T. giganteum.

关 键 词：巨大口蘑 实时荧光定量PCR 内参基因 Β-TUBULIN 

分 类 号：S646[农业科学—蔬菜学]