HL-60细胞Nucleostemin表达下调对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的影响  

Influence of Nucleostemin Expression Down-Regulation on PI3K/AKT/mTOR Signal Pathway in HL-60 Cells

作　　者：贾宇[1,2] 魏园玉 李曌博 张帆 刘帅 岳保红 

机构地区：[1]郑州大学第一附属医院肾内科实验室 [2]郑州大学第一附属医院肾内科实验室郑州大学医学检验系河南省检验医学重点实验室河南省高等学校临床重点学科开放实验室,河南郑州450052 [3]郑州大学第三附属医院检验科 [4]河南省人民医院血液研究所 [5]河南省肿瘤医院中心实验室 [6]郑州大学第一附属医院检验科郑州大学医学检验系河南省检验医学重点实验室河南省高等学校临床重点学科开放实验室,河南郑州450052

出　　处：《中国实验血液学杂志》2017年第6期1592-1596,共5页Journal of Experimental Hematology

基　　金：国家自然科学基金(81271911);河南省医学科技攻关重点项目(201002006)资助

摘　　要：目的:探讨HL-60白血病细胞中核干细胞因子Nucleostemin(NS)表达下调对其非依赖P53通路的候选途径PI3K/AKT/mTOR中相关蛋白表达是否有影响。方法:采用重组慢病毒表达载体NS-RNAi-GV248转染至P53缺失型HL-60细胞中干扰NS的表达。用Western blot技术评价转染后HL-60细胞NS蛋白的表达水平并检测干扰前后PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关蛋白水平的表达变化。结果:重组慢病毒载体NS-RNAi-GV248成功感染了HL-60细胞,在荧光显微镜下可见到GFP荧光表达较强(<80%)。Western blot结果显示,NS蛋白表达明显下调,干扰表达有效;干扰HL-60细胞中NS的表达后AKT、p-AKT、p70s6k、p-p70s6k蛋白变化不明显(t_1=2.31,P=0.074;t_2=3.62,P=0.069;t_3=1.60,P=0.251;t_4=2.72,P=0.113),而mTOR复合物中的GβL蛋白表达明显下调(t=15.01,P=0.002)。结论:HL-60细胞中NS蛋白可影响mTOR复合物中GβL蛋白的表达,PI3K/AKT/mTOR通路可能为NS非依赖P53作用途径之一。Objective： To explore the effect of nucleostemin（ NS） RNAi on the expression of signal molecules in PI3K/AKT/mTOR pathway,a candidate of p53-independent signal pathway in the leukemia HL-60 cells. Methods： The expression of NS was interfered by transfection of P53-deficient HL-60 cells with the recombinant lentivirus expression vector NS-RNAi-GV248. The exression of NS and signal molecules of PI3K/AKT/mTOR pathway were detected by Western blot. Results： The fluorescence microscopy showed that the recombinant lentivirus vector NS-RNAi-GV248 transfected HL-60 cells successfully with a 80% transfection rate. Western blot showed that the expression of NS protein was inhibited obviously in HL-60 cells,and the expression levels of AKT,p-AKT,p70s6k and p-p70s6k were not statistically different（ t1= 2. 31,P〈0. 05; t2= 3. 62,P〈0. 05; t3= 1. 60,P〉0. 05; t4= 2. 72,P〉0. 05） in comparison with control; the expression of GβL protein was statistically down-regnlated（ t = 15. 01,P = 0. 002）. Conclusion： The changes of GβL protein correlats with NS knockdown. The PI3K/AKT/mTOR pathway may be one of nucleostemin p53-independent signal pathways.

关 键 词：核干细胞因子 PI3K/AKT/mTOR信号通路 HL-60细胞 P53缺失型 

分 类 号：R733.7[医药卫生—肿瘤]