葛根素对人胆管癌RBE细胞凋亡的影响  

Effect of puerarin on the apoptosis of human cholangiocarcinoma RBE cells

作　　者：李彬彬 付强[2] 王玉柱[2] 胡明星[2] 刘传江[2] 秦涛[2] 

机构地区：[1]锦州医科大学河南省人民医院研究生培养基地,郑州450003 [2]河南省人民医院肝胆胰腺外科,郑州450003

出　　处：《中华实验外科杂志》2018年第1期82-84,共3页Chinese Journal of Experimental Surgery

基　　金：国家自然科学基金（31140078、31671440）

摘　　要：目的观察葛根素对人胆管癌（RBE）细胞增殖和凋亡的影响，及其相关基因表达量变化。方法RBE细胞培养后，使用不同浓度（0、100、250、500、1 000、1 500 μg/ml）的葛根素处理细胞，噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力；（500、1 000 μg/ml）葛根素处理RBE细胞，流式细胞学技术（FCM）检测细胞凋亡；实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）、bcl-2相关X蛋白（bax）基因的表达；Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果MTT法细胞活力检测显示高浓度葛根素（500、1 000、1 500 μg/ml）以时间-剂量依赖的方式抑制RBE细胞的增殖，12 h抑制率[（8.14±1.85）%、（12.57±3.10）%、（18.26±2.74）%，P＝0.000、0.005、0.003]，24 h抑制率[（22.38±2.77）%、（29.14±3.85）%、（37.43±2.11）%，P＝0.005、0.007、0.002]，48 h抑制率[（35.47±3.75）%、（40.81±2.52）%、（52.29±3.98）%，P＝0.007、0.000、0.002]差异均有统计学意义；（500、1 000 μg/ml）葛根素处理RBE细胞24 h后，RBE细胞凋亡率[（14.21±2.53）%、（22.87±2.74）%]较对照组[（3.246±2.25）%]明显升高，差异有统计学意义（P＝0.013、0.008）；凋亡基因bax表达量与对照组（0.98±0.04）比较升高[（2.37±0.17）、（3.78±0.41）倍，P＝0.005、0.003]，bcl-2表达量与对照组（0.99±0.03）比较下降（1.57±0.14、2.86±0.55）倍（P＝0.002、0.008），差异均有统计学意义；活化半胱酰胺天冬氨酸特异性蛋白酶（Cleaved-caspase）-8、Cleaved-Caspase-9蛋白及bax蛋白表达水平升高（P＝0.015、0.003、0.008），bcl-2蛋白表达水平降低（P＝0.021），差异均有统计学意义。结论葛根素具有抑制RBE细胞增殖，促进其凋亡的作用。Objective To study the effects of puerarin on the proliferation and apoptosis of human cholangiocarcinoma （RBE） cells and the expression of related genes.MethodsRBE cells cultured were treated with puerarin at different concentrations （0, 100, 250, 500, 1 000, 1 500 μg/ml）. And then methyl thiazol tetrazolium （MTT） assay was used to measure cell viability. Flow cytometry （FCM） was used to detect the apoptosis of RBE cells treated with puerarin at （500, 1 000 μg/ml） concentrations. The expression levels of B cell lymphoma/leukemia-2 （bcl-2） and bcl-2 associated X protein （bax） genes were detected by real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction （RT-qPCR）. Western blotting was used to detect the expression of apoptosis-related proteins.ResultsMTT assay revealed that puerarin （500, 1 000, 1 500 μg/ml） inhibited the proliferation of RBE cells in a time- and dose-dependent manner, with inhibition rate at 12, 24 and 48 h being （8.14±1.85）%, （12.57±3.10）% and （18.26±2.74）% （P=0.000, 0.005, 0.003）, （22.38±2.77）%, （29.14±3.85）% and （37.43±2.11）% （P=0.005, 0.007, 0.002）, and （35.47±3.75）%, （40.81±2.52）% and （52.29±3.98）% （P=0.007, 0.000, 0.002） respectively. After RBE cells were treated with puerarin at （500, 1 000 μg/ml） for 24 h, the apoptosis rate [（14.21±2.53）% and （22.87±2.74）%] was increased greatly as compared with the control group [（3.246±2.25）%] （P=0.013, 0.008）. The expression of bax was up-regulated （2.37±0.17 and 3.78±0.41） times as compared with the control group （0.98±0.04） （P=0.005, 0.003）, and the expression of bcl-2 was down-regulated （1.57±0.14 and 2.86±0.55） times as compared with the control group （0.99±0.03） （P=0.002 and 0.008）. The expression levels of Cleaved-Caspase-8, Cleaved-Caspase-9 and bax protein were increased （P=0.015, 0.003 and 0.008） and those of bcl-2 protein were decreased （P=0.021）.ConclusionPuerarin can i

关 键 词：葛根素 胆管癌 增殖 脱噬作用 

分 类 号：R735.8[医药卫生—肿瘤]