水稻OsDREB1A的原核表达及重组蛋白活性分析  

Prokaryotic Expression and Transcription Activity Analysis of OsDREB1A from Rice

作　　者：霍晨敏[1,2] 商建秀[1] 王瑞菊[1] 

机构地区：[1]河北师范大学生命科学学院,石家庄050024 [2]河北经贸大学生物科学与工程学院,石家庄050061

出　　处：《分子植物育种》2017年第12期4784-4790,共7页Molecular Plant Breeding

基　　金：河北师范大学杰出青年基金(L2016J03);河北经贸大学重点科研项目(2014ZY07);河北省博后择优资助(B2015003022);河北省高等学校科学技术研究项目(QN2017059)共同资助

摘　　要：OsDREB1A是水稻冷信号传导途径中重要的转录因子。本研究将水稻日本晴OsDREB1A基因通过双酶切方法连接至MSC-TOPOII载体,并重组构建到表达载体PGEX-4T-1,获得融合蛋白表达质粒PGEX-4T-1-OsDREB1A,转化表达菌E.coli BL21(DE3)Condon Plus,诱导表达后通过亲和层析柱Glutathione agarose 4B纯化获得了分子量大小正确的OsDREB1A-GST融合蛋白,EMSA检测发现低温18℃诱导纯化的融合蛋白可以在体外成功结合CRT/DRE顺式元件。为进一步研究OsDREB1A在冷信号传导中的生物学功能奠定了基础。OsDREB1 A is a key transcription factor in rice cold signal transduction pathway. Here we cloned the OsDREB1 A gene into MSC-TOPO-II vector by double enzyme digestion, then reconstructed it to prokaryotic expression vector PGEX-4 T-1 by LR reaction, the recombinant vector p GEX4 T-1-OsDREB1 A-GST was transformed into E. coli. BL21（DE3） Condon Plus. Recombinant protein OsDREB1 A-GST was purified by glutathione agarose 4 B after induce. The EMSA assay showed the OsDREB1 A-GST protein induced under 18℃binding directly to CRT/DRE cis-element in OsPLDα1 promoter in vitro. These results provide foundations for the biological function study of OsDREB1 A in cold signal transduction.

关 键 词：水稻 OsDREB1A 原核表达 凝胶阻滞分析 

分 类 号：S511[农业科学—作物学]