丙酮醛降解酶基因的克隆与高效表达  

作　　者：王平[1] 赵巧巧 黄鹰[1] 

机构地区：[1]南京师范大学生命科学学院,江苏南京210046 [2]邹平第一中学,山东滨州256200

出　　处：《江苏农业科学》2016年第2期62-65,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金(编号:31070703)

摘　　要：由于丙酮醛降解酶(methylglyoxal degradation enzyme,MD)是生物体内代谢丙酮醛的一种关键酶,实现MD的高效表达对调控丙酮醛的代谢途径具有重要意义。所以根据Schizosaccharomyces pombe_Gene DB中MD的基因序列(SPAC22E12.03C)设计引物,以粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)c DNA文库为模板通过PCR扩增技术得到目标基因,目的片段全长576 bp。将SPAC22E12.03C连接到p ET-28a(+)上,得到重组质粒p ET-28a(+)-SPAC22E12.03C,并在Escherichia coli BL2l(DE3)中实现表达。同时,对其目的蛋白的表达条件进行了优化,获得最佳表达条件:诱导温度37℃,诱导起始菌体D600 nm为0.5~0.6,诱导剂IPTG浓度为0.8 mmol/L。这为研究粟酒裂殖酵母体内丙酮醛的降解途径打下了坚实基础。

关 键 词：粟酒裂殖酵母 丙酮醛降解酶 丙酮醛 基因克隆 基因表达 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学] Q55