Pannexin1,2在小鼠睾丸癌I-10细胞和睾丸间质细胞TM3中的表达及通道功能调控  

Expressions of pannexin proteins in I-10 Leydig tumor cells and TM3 Leydig cells and their regulatory effect on the channel function in mice

作　　者：刘号峰 董淑英 苑敏 王雪如 武丹丹 范威振 童旭辉 LIU Hao-feng;DONG Shu-ying;YUAN Min;WANG Xue-ru;WU Dan-dan;FAN Wei-zhen;TONG Xu-hui(Faculty of Pharmacy,School of Pharmacology,Bengbu Medical College,Bengbu,Anhui 233030,China)

机构地区：[1]蚌埠医学院药学院药理学教研室,安徽蚌埠233030

出　　处：《中华男科学杂志》2018年第9期776-781,共6页National Journal of Andrology

基　　金：高校优秀青年人才支持计划重点项目(gxyq ZD2016158);蚌埠医学院研究生科研创新计划项目(byycx1711);蚌埠医学院大学生创新训练项目(201710367007)~~

摘　　要：目的:探讨泛连接蛋白(Panx)蛋白在小鼠睾丸癌I-10细胞与睾丸间质细胞TM3中的表达水平及其功能调控。方法:Western印迹法检测Panx-1和Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平;使用Panx通道抑制剂100μmol/L的甘珀酸(CBX)、200μmol/L的丙磺舒(PBN)作用于I-10细胞后,采用实时荧光法检测细胞间荧光传递能力;化学发光法检测细胞外ATP浓度;分别干扰(shRNA)和过表达(m Panx-1) Panx-1基因,调控Panx-1蛋白的表达及功能。结果:Western印迹结果显示,与TM3细胞相比,I-10细胞中Panx-1和Panx-2的表达量分别增加(289. 5±55. 8)%(P <0. 05)和(264. 5±24. 6)%(P <0. 05);采用CBX和PBN处理后,实时荧光实验和化学发光法结果显示,与对照组相比,CBX组和PBN组平均荧光物质转运量下降(87. 5±17. 7)%和(89. 3±14. 3)%(P<0. 01),细胞外ATP水平在8、16、24 h时分别下降(57. 3±7. 2)%、(56. 4±9. 6)%,(63. 4±6. 4)%、(61. 7±2. 5)%,(35. 8±1. 6)%、(13. 5±8. 3)%(P <0. 01); shRNA和m Panx-1处理后,Western印迹结果显示,与阴性对照组相比,shRNA1和shRNA2组中Panx-1的表达量下降(38. 3±5. 2)%和(31. 8±5. 1)%(P <0. 01),m Panx-1组Panx-1的表达量增加(128. 4±7. 5)%(P <0. 01),且实时荧光实验和化学发光法结果显示,shRNA组荧光物质转运量下降(72. 4±39. 4)%(P <0. 01)和细胞外ATP含量在8、16、24 h分别下降(14. 7±0. 1)%、(13. 7±0. 3)%、(13. 1±0. 3)%(P <0. 01); m Panx-1组荧光物质转运量增加(122. 5±. 17. 1)%(P <0. 01)和细胞外ATP含量在8、16、24 h分别增加(886. 1±82. 1)%、(885. 8±83. 3)%、(841. 5±21. 8)%(P <0. 01)。结论:Panx-1和Panx-2在小鼠睾丸癌I-10细胞中表达增多,CBX和PBN及shRNA抑制Panx通道后,睾丸癌I-10细胞荧光传递能力减弱和细胞外ATP水平下降。Objective： To investigate the expressions of the pannexin （Panx） proteins in 1-10 Leydig tumor cells and TM3 Leydig cells and their regulatory effect on the Panx channel function in mice. Methods： The expressions of the Panx-1 and Panx-2 proteins in the mouse Leydig tumor cells were determined by Western blot. The 1-10 Leydig tumor cells were treated with carbenoxolone （CBX） at 100 μmol/L or probenecid （PBN） at 200 μmol/L, the fluorescence resonance energy transfer （FRET） detected by time-lapse fluorescence imaging, and the extracellular adenosine 5＇-triphosphate （eATP） level measured with the commercial detection kit. Molecular biological methods were used to interfere with shRNA and overexpress mPanx-1 the Panx-1 gene and regulate the expression and function of the Panx-1 protein. Results： The expressions of Paux-1 （[289.5 ± 55.8]% ） and Panx-2 （L264.5 ± 24.6]% ） were significantly increased in the 1-10 Leydig tumor cells as compared with those in the normal TM3 Leydig cells （both P 〈 0.05 ）. FRET was remarkably reduced after treated with CBX （ [ 87.5 ± 17.7 ] % ） and PBN （ [ 89.3 ± 14.3 ] % ） in comparison with that in the control group （both P 〈 0.01）. At 8, 16 and 24 hours, the eATPlevel was decreased by （57.3 ± 7.2） %, （56.4 ± 9.6）% and （63.4 ± 6.4）% in the CBX group （P 〈 0.01） and （61.7 ± 2.5）%, （35.8 ± 1.6）% and （13.5 ± 8.3）% in the PBN group （P 〈 0.01 ）. Molecular biological treatment down-regulated the expression of Panx-I by （38.3 ± 5.2） % and （31.8 ± 5.1 ） % in the shRNA1 and shRNA2 groups, respectively （ both P 〈 0.01 ）, but up-regulated that of Panx-1 by （ 128.4 ± 7.5 ） % in the mPanx-1 group （P 〈 0.01 ） as compared with the negative control. FRET was reduced by （72.4 ± 39.4） % in the shRNA group （P 〈 0.01） and theeATPlevelby （14.7 ± 0.1）%, （13.7 ± 0.3）% and （13.1 ± 0.3）% at 8, 16 and 24 hours, respectively （P 〈 0.01） while FRET elevated b

关 键 词：泛连接蛋白通道 ATP 甘珀酸 丙磺舒 小鼠 

分 类 号：R737.21[医药卫生—肿瘤]