利用Tet-on诱导基因表达系统构建EID3基因真核表达载体及稳定转染细胞株的建立  

作　　者：王燕 王宇暄 刘亚敏 张桂强 苏文洲 郭奇峰 

机构地区：[1]华南理工大学附属第二医院鹤洞分院骨科,广东广州510380

出　　处：《广东医学》2018年第18期2737-2740,共4页Guangdong Medical Journal

基　　金：华南理工大学中央高校基本科研业务费资助项目(编号:2017BQ111)

摘　　要：目的构建类E1A细胞分化抑制因子3(EID3)真核表达载体,并转染人乳腺癌细胞(MCF-7),建立Tet-on诱导表达的目的基因EID3的稳定转染细胞系。方法应用PCR技术,得到目的基因EID3的c DNA,通过双酶切、胶回收方法纯化目的片段EID3。DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体p LVuTight-Puro,经菌落酶切、电泳以及测序鉴定。将真核表达质粒p LVu-Tight-Puro-EID3和p LVX-Tet-On Advanced Vector转染MCF-7细胞,分别通过G418和嘌呤霉素选择培养,建立由四环素(doxycycline,DOX)诱导表达的稳定转染细胞系,RT-PCR、Western Blot分别检测目的基因EID3在DOX诱导下mRNA以及蛋白的表达。结果成功构建了p LVu-Tight-Puro-EID3表达质粒,并建立了由DOX诱导表达的稳定转染细胞系,可在DOX诱导下稳定表达EID3基因的mRNA及蛋白。结论人EID3稳定表达细胞系为研究EID3基因在肿瘤辐射敏感性及药物敏感性的作用提供实验基础。

关 键 词：EID3 MCF-7细胞 Tet-on系统 

分 类 号：R730.5[医药卫生—肿瘤]