鸭坦布苏病毒、产蛋下降综合征病毒和H9亚型禽流感病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立  

作　　者：孙敏华[1] 李林林[1] 董嘉文[1] 刘志成[1] 孙俊颖[1] 沈海燕[1] 张建峰[1] 张春红[1] 

机构地区：[1]广东省农业科学院动物卫生研究所,广东省畜禽疫病防治研究重点实验室,广东省兽医公共卫生公共实验室,广东广州510640

出　　处：《广东畜牧兽医科技》2017年第4期37-42,共6页Guangdong Journal of Animal and Veterinary Science

基　　金：广东省科技计划项目(2013B020307001,2013B020315005,2014A040401048,2015B020203003,2015B050501007,2015B070701015);广东省农业科学院院长基金项目(201412)

摘　　要：参考Gen Bank上已发表的产蛋下降综合征病毒(EDSV)五邻体(penton)基因序列、H9亚型禽流感病毒的HA基因和鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因序列,分别设计了检测EDSV、H9 AIV和DTMUV的特异性引物,扩增目的片段大小分别为110bp、281bp和266bp。通过PCR验证及引物浓度的优化,建立了针对这3种病毒的三重荧光PCR检测方法。特异性试验结果表明,该方法可以同时检测EDSV、H9 AIV和DTMUV,且不与鸭瘟病毒、鹅细小病毒、番鸭细小病毒和大肠杆菌基因组DNA以及鸭甲肝病毒1型、鸭甲肝病毒3型、番鸭呼肠孤病毒和新城疫病毒的RNA发生交叉反应;敏感性试验表明,该方法对EDSV、H9 AIV和DTMUV核酸的检测下限分别为8.0、4.8和1.3个拷贝,该方法比常规PCR方法敏感10倍;该方法重复性良好,对不同批次的样品扩增效果良好。通过标准曲线的建立以及临床样品的检测表明,该方法可以用于EDSV、H9 AIV和DTMUV的定性和定量检测。

关 键 词：鸭坦布苏病毒 产蛋下降综合征病毒 H9亚型禽流感病毒 三重荧光PCR 

分 类 号：S855.3[农业科学—临床兽医学]