人乳铁蛋白的沙漠小球藻表达系统的构建与鉴定  

作　　者：牟云[1] 汪文伦 许万云[1] 胡梦薇[1] 王丹[1] 严国 王会敏[1] 高剑峰[1] 

机构地区：[1]石河子大学生命科学学院,新疆石河子83200

出　　处：《江苏农业科学》2017年第19期138-142,共5页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：国家自然科学基金(编号:31460276)

摘　　要：为获得人乳铁蛋白的沙漠小球藻(Chlorella sp.GTD8A1)的表达系统和稳定的小球藻GTD8A1-h LF工程藻种,将人乳铁蛋白基因导入小球藻细胞中进行表达鉴定。以人血c DNA为模板,RT-PCR扩增得到人乳铁蛋白基因(Gen Bank登录号NM-002343.4),经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后,连接到植物表达载体p CAMBIA2300-35S-OCS中,获得重组质粒载体p CAMBIA2300-35S-h LF-OCS,将重组质粒电击转入GTD8A1中,通过菌落PCR鉴定后扩大培养,在DNA和RNA水平分析人乳铁蛋白基因的整合和转录,SDS-PAGE和Western Blot分析获得70 ku的目的蛋白;将转基因藻种(GTD8A1-h LF)在BBM培养基中进行培养周期优化。结果表明,重组人乳铁蛋白在沙漠小球藻细胞中表达成功;通过Elisa测其人乳铁蛋白表达量在20 d时达到最大,浓度为13.28 mg/L。

关 键 词：小球藻 人乳铁蛋白 表达系统 SDS-PAGE WESTERNBLOT 构建 鉴定 

分 类 号：S188[农业科学—农业基础科学]