鸡α干扰素真核表达载体的改造及在毕赤酵母中的分泌表达  

Modification of eukaryotic expression vector of chicken α interferon and its secretion expression in Pichia pastoris

作　　者：曹丁 李学优 昝继清 兰玲峰 甘祥武 Cao Ding

机构地区：[1]广州市微生物研究所

出　　处：《江苏农业科学》2019年第19期68-68,69-71,共4页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：广州市科技计划(编号:201610010087)

摘　　要：旨在利用毕赤酵母密码子的偏好性和遗传简并性,将鸡α干扰素优化基因片段cIFN-α2连入毕赤酵母表达载体pPIC9k,再经重叠延伸PCR方法去除重组质粒的5′端非翻译区多余的8个核苷酸GGATCCAA,使其与毕赤酵母AOX1(醇氧化酶)的5′端非翻译区的序列完全一致,构建并筛选重组毕赤酵母,并进行摇瓶诱导表达试验。将表达产物用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行检测,并用微量病变抑制法检测其抗病毒效价。抗病毒活性检测结果显示,天然基因、优化基因、质粒5′端非翻译区改造后的优化基因重组质粒表达产物的抗病毒效价分别为10^5、10^6、1.5×10^6 U/mL。鸡α干扰素基因优化后的抗病毒效价提高了10倍,对质粒5′端非翻译区进行进一步改造后,表达蛋白的抗病毒活性提高了50%,从而为鸡α干扰素的工业化生产奠定了基础。

关 键 词：鸡α干扰素 真核表达 PPIC9K 分泌表达 抗病毒活性 

分 类 号：Q786[生物学—分子生物学]