GⅡ型诺如病毒装甲RNA质控品研制  

Preparation of armored RNA as quality controls for nucleic acid test of GⅡ norovirus

作　　者：宋士利[1] 李明强[1] 孙亚萍[1] SONG Shili;LI Mingqiang;SUN Yaping

机构地区：[1]杭州市余杭区疾病预防控制中心检验科,浙江杭州311100

出　　处：《预防医学》2021年第5期536-540,共5页CHINA PREVENTIVE MEDICINE JOURNAL

摘　　要：目的采用MS2噬菌体装甲RNA技术构建内含GⅡ型诺如病毒RNA的装甲RNA质控品,为诺如病毒核酸检测提供安全稳定的标准品。方法将MS2噬菌体成熟酶蛋白、包膜蛋白和调节位点基因(PAC基因)及GⅡ型诺如病毒520 bp片段克隆到表达质粒pET30b中,构建重组质粒p ET-PAC,pET-PAC转入大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞进行原核表达,表达产物纯化后鉴定并进行定量及稳定性分析。结果研究成功构建和表达了耐RNA酶、内含GⅡ型诺如病毒片段的装甲RNA——AR-GⅡ。聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示AR-GⅡ病毒颗粒的蛋白分子量约为14.4 kD,纯化后的AR-GⅡ无宿主菌DNA、RNA等杂质残留,每1 m L LB培养基可诱导约1.5×10^(12)copies的AR-GⅡ。AR-GⅡ在37℃、4℃条件下可以稳定8周以上,-20℃反复冻融8次RNA病毒浓度也无明显衰减,稳定性良好。结论基于MS2噬菌体制备的AR-GⅡ拷贝数高,稳定性好且能耐受RNA酶攻击,可以作为标准样品用于监控诺如病毒核酸提取、反转录和扩增等全过程。

关 键 词：GⅡ型诺如病毒 MS2噬菌体 装甲RNA 质控品 

分 类 号：R373.2[医药卫生—病原生物学]