欧当归内酯A对人胶质瘤细胞U251细胞凋亡及自噬的影响  

Effect of levistilide A on apoptosis and autophagy of human glioma cell line U251

作　　者：王利莹 陆玉成[2] 王丽娟 王蒙恩 韦志永[4] 车峰远[3] WANG Liying;LU Yucheng;WANG Lijuan;WANG Meng′en;WEI Zhiyong;CHE Fengyuan(School of Clinical Medicine,Weifang Medical University,Weifang 261000,Shandong Province,China;Biological Sample Library,Linyi People′s Hospital,Linyi 276000,Shandong Province,China;Central Laboratory,Linyi People′s Hospital,Linyi 276000,Shandong Province,China;Department of Pathology,Linyi People′s Hospital,Linyi 276000,Shandong Province,China)

机构地区：[1]潍坊医学院临床医学院,山东潍坊261000 [2]临沂市人民医院生物样本库,山东临沂276000 [3]临沂市人民医院中心实验室,山东临沂276000 [4]临沂市人民医院病理科,山东临沂276000

出　　处：《新乡医学院学报》2022年第3期201-207,共7页Journal of Xinxiang Medical University

基　　金：山东省医药卫生科技发展计划项目(编号:2019WS125)。

摘　　要：目的探讨欧当归内酯A(LA)对人胶质瘤细胞U251凋亡及自噬的影响。方法将对数生长期的U251细胞随机分为空白组、30μmol·L^(-1)LA组、60μmol·L^(-1)LA组、90μmol·L^(-1)LA组,分别用含有0、30、60、90μmol·L^(-1)的LA培养基培养24、48、72 h,应用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测4组细胞的增殖能力,应用流式细胞术检测4组细胞培养24 h时的细胞凋亡率。将对数生长期的U251细胞分为空白组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、90μmol·L^(-1)LA组、30μmol·L^(-1)LA+3-MA组、60μmol·L^(-1)LA+3-MA组、90μmol·L^(-1)LA+3-MA组,空白组不加LA和3-MA,其余5组分别加入含0、90、30、60、90μmol·L^(-1)LA和1、0、1、1、1 mmol·L^(-1)3-MA的培养基培养24 h,采用CCK-8检测各组细胞活性。应用Western blot法检测空白组、30μmol·L^(-1)LA组、60μmol·L^(-1)LA组、90μmol·L^(-1)LA组细胞中p53、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、caspase-3、微管相关蛋白1A/1B-轻链3抗体(LC3)-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白相对表达量。结果培养24、48、72 h时,30μmol·L^(-1)LA组、60μmol·L^(-1)LA组和90μmol·L^(-1)LA组的细胞增殖能力显著低于空白组,60μmol·L^(-1)LA组和90μmol·L^(-1)LA组细胞增殖能力显著低于30μmol·L^(-1)LA组,90μmol·L^(-1)LA组细胞增殖能力显著低于60μmol·L^(-1)LA组(P<0.05)。空白对照组培养24、48、72 h时的细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。30μmol·L^(-1)LA组培养72 h时的细胞增殖能力显著高于培养24、48 h时(P<0.05),培养24 h与48 h时的细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05);60μmol·L^(-1)LA组培养48、72 h时的细胞增殖能力显著低于培养24 h时(P<0.05),培养48 h与72 h时的细胞增殖能力比较差异无统计学意义(P>0.05)。90μmol·L^(-1)LA组培养48、72 h时的细胞增殖能力显著低于培养24 h时,培养72 h时的细胞增殖能力显著低于48 h时(P<0.05)。30μmol·L^(-1)LA组、60μmol·L^(-1)LA组、90μmol·L^(-1)LA组细�Objective To investigate the effect of levistilide A(LA)on the apoptosis and autophagy of human glioma cell U251.Methods The U251 cells in logarithmic growth phase were randomly divided into blank group,30μmol·L^(-1)LA group,60μmol·L^(-1)LA group and 90μmol·L^(-1)LA group.The cells were cultured in medium containing 0,30,60 and 90μmol·L^(-1)LA for 24,48 and 72 h,respectively.The proliferation ability of U251 cells in the four groups was detected by using cell counting kit-8(CCK-8),and the apoptosis rate of U251 cells at 24 h of culture in the four groups was detected by using flow cytometry.The U251 cells in logarithmic growth phase were divided into blank group,3-methyladenine(3-MA)group,90μmol·L^(-1)LA group,30μmol·L^(-1)LA+3-MA group,60μmol·L^(-1)LA+3-MA group and 90μmol·L^(-1)LA+3-MA group.The blank group did not add LA and 3-MA,the other 5 groups were cultured for 24 h in medium containing 0,90,30,60,90μmol·L^(-1)LA and 1,0,1,1,1 mmol·L^(-1)3-MA,respectively,and the activity of cells in the six groups was detected by CCK-8.The relative expression levels of p53,B-cell lymphoma-2(Bcl-2),Bcl2-associated X(Bax),caspase-3,microtubule associated protein 1A/1b light chain 3(LC3)-Ⅰand LC3-Ⅱprotein in the blank group,30μmol·L^(-1)LA group,60μmol·L^(-1)LA group and 90μmol·L^(-1)LA group were detected by Western blot.Results At 24,48,72 h of culture,the cell proliferation ability in the 30μmol·L^(-1)LA group,60μmol·L^(-1)LA group and 90μmol·L^(-1)LA group was significantly lower than that in the blank group(P<0.05);the cell proliferation ability in the 60μmol·L^(-1)LA group and 90μmol·L^(-1)LA group was significantly lower than that in the 30μmol·L^(-1)LA group(P<0.05);the cell proliferation ability in the 90μmol·L^(-1)LA group was significantly lower than that in the 60μmol·L^(-1)LA group(P<0.05).There was no significant difference in cell proliferation ability in the blank control group among 24,48 and 72 h of culture(P>0.05);the cell proliferation ability in the 30μmol·

关 键 词：胶质瘤细胞 欧当归内酯A 凋亡 自噬 

分 类 号：R739.41[医药卫生—肿瘤]