高中综合实验设计——以"表达和纯化红色荧光蛋白标记的类弹性蛋白"为例  

Comprehensive experimental design for high school:Talcing the expression and purification of fusion protein mCherry-elastin as an example

作　　者：张蕾 Zhang Lei

机构地区：[1]徐汇中学,上海200030

出　　处：《生物学通报》2022年第4期46-49,共4页Bulletin of Biology

摘　　要：以类弹性蛋白(elastin-like polypeptide,ELP)作为非色谱纯化标签,分离纯化红色荧光蛋白mCherry.ELP与△I-CM(intein cleavage mutant)的N端连接,mCherry片段与△I-CM的C端连接,在ELP的N端插入GFP片段,用于检测蛋白纯度.采用低温诱导的方式实现重组蛋白在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中可溶性表达.可逆相变循环,分离纯化融合蛋白GFP-ELP-IN-mCherry,通过改变温度和pH诱导内含肽自剪切,再利用ELP的特性去除GFP-ELP-IN标签,得到目的蛋白mCherry.学生通过本实验可掌握蛋白质分离纯化技术,提高了动手实践的能力.

关 键 词：类弹性蛋白 内含肽 生物工程 红色荧光蛋白 

分 类 号：G63[文化科学—教育学]