阿胶不同酶解物HPLC指纹图谱建立  

作　　者：付英杰[1] 王肖 贾玉民 侯林[3] 王建安[1] 于定荣[4] 赵颖异 

机构地区：[1]济宁医学院药学院,山东日照276826 [2]东阿阿胶股份有限公司,国家胶类中药工程技术研究中心,山东聊城252201 [3]山东中医药大学药学院,山东济南250355 [4]中国中医科学院中药研究所,北京100700

出　　处：《中成药》2022年第8期2731-2735,共5页Chinese Traditional Patent Medicine

基　　金：国家自然科学基金青年基金项目(81703703);国家自然科学基金应急管理项目(81541089);国家大学生创新训练计划项目(201610443068);济宁医学院大学生创新训练计划项目(cx2015058)。

摘　　要：目的建立阿胶多种酶解物HPLC指纹图谱。方法对流动相选择、酶种类筛选、酶用量、辅料、试剂及酶干扰的考察,通过精密度、稳定性、重现性、验证性试验,以HPLC色谱图峰形、相似度等为指标,确定分析方法。Dikma C_(18)色谱柱;流动相0.2 mol/L Na_(2)SO_(4)⁃H_(3)PO_(4)(pH 2.3)(A)⁃90%乙腈(B),梯度洗脱;体积流量1 mL/min;进样量20μL;检测波长280 nm。结果取5%阿胶水炖化液,分别加入100000 U/g胃蛋白酶、25000万U/g胰蛋白酶、300000 U/g木瓜蛋白酶、25000 U/g糜蛋白酶,调pH后于40℃酶解4 h,接着95℃灭活20 min,依次用脱脂棉、定量滤纸、0.45μm微孔滤膜过滤,制成4个样品。阿胶辅料、加入试剂及胰蛋白酶对分析无干扰,其他酶需排除干扰。精密度及重现性图谱相似度>0.9,保留时间RSD<2%,多数峰面积RSD<10%。样品冷冻需不超过2 d。除胃蛋白酶外,其余3种酶解物保留时间RSD<2%,相似度>0.9。结论采用不同蛋白酶的酶解产物作为样品进行特征谱带研究,其信息量更大,且由于酶切位点固定,各样品的酶解物组成相对稳定。为后续进行的酶解物⁃HPLC法对阿胶特征峰及规律研究提供参考。

关 键 词：阿胶 酶解 HPLC 指纹图谱 方法学 

分 类 号：R284.1[医药卫生—中药学]