干扰素刺激基因鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)质粒的构建及其抗汉滩病毒感染的作用  

作　　者：屈思瑞 王芳 张俊梅 应旗康 赵瑞华[1] 古天乐 吴兴安 

机构地区：[1]延安大学生命科学学院,陕西延安716000 [2]空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室,陕西西安710032

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2023年第10期917-923,共7页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家自然科学基金(81971563,82272330);陕西省重点研发计划(2019ZDLSF02-03);陕西省自然科学基础研究计划(2021JM-219);空军军医大学军事医学提升计划(2018JSTS08);中国博士后科学基金资助项目(2022M713848)。

摘　　要：目的构建pCMV-GBP2-3tag6真核表达质粒,研究鸟苷酸结合蛋白2(GBP2)在汉滩病毒(HTNV)感染过程中的作用。方法利用一步定向克隆(In-fusion)方法构建pCMV-GBP2-3tag6质粒,并用双酶切和测序方法进行鉴定。将构建成功的pCMV-GBP2-3tag6质粒转染A549细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。A549细胞转染GBP2质粒24 h后感染HTNV。实时定量PCR检测HTNV S、β干扰素(IFN-β)、黏病毒抗性蛋白1(MX1)、干扰素诱导蛋白四肽重复序列1(IFIT1)、CXC趋化因子配体10(CXCL10)基因mRNA表达水平,Western blot法检测GBP2和HTNV核衣壳蛋白(NP)表达,病灶形成实验检测细胞上清中HTNV滴度。结果成功构建pCMV-GBP2-3tag6真核表达质粒,并在A549细胞中成功表达GBP2蛋白;过表达GBP2对细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡无影响,但是可以显著降低细胞中HTNV S基因mRNA水平和NP蛋白含量以及细胞上清中HTNV滴度,调控HTNV感染后IFN通路相关基因的表达。结论GBP2可能通过调控IFN的反应抑制HTNV感染。

关 键 词：鸟苷酸结合蛋白2(GBP2) 汉滩病毒(HTNV) 抗病毒 IFN 

分 类 号：R373.9[医药卫生—病原生物学] R364.5[医药卫生—基础医学]