海藻酸钙固定化重组暗紫贝母PAL蛋白  

作　　者：李响 童婧莹 张鑫薇 刘玢 秦余 唐婕 苗祖源 许天成 廖海[1] 周嘉裕[1] 

机构地区：[1]西南交通大学生命科学与工程学院,成都610031

出　　处：《中南农业科技》2024年第7期80-84,共5页South-Central Agricultural Science and Technology

基　　金：成都市科技局项目(2022-YF05-01357-SN);中央高校医工结合项目(2682022ZTPY053);四川省中医药管理局项目(2021MS116);国家级大学生创新创业训练计划资助项目(202310613068);西南交通大学个性化实验项目(GX202316017)。

摘　　要：利用IPTG诱导含暗紫贝母(Fritillaria unibracteata)苯丙氨酸解氨酶FuPAL-pET28a的重组大肠杆菌BL21菌株,经Ni2+亲和层析与质谱鉴定获得纯度较高的FuPAL重组蛋白。以海藻酸钙凝胶为固定化介质,包埋FuPAL重组蛋白。单因素考察试验与统计学分析结果表明,海藻酸钠质量分数、CaCl_(2)浓度、固定化时间、海藻酸钠与酶质量比影响固定化酶的活性,它们的最优条件分别为3.5%、1g/L、4 h与40 000:1。进一步采用L9(3~4)正交试验设计,确定影响因素的重要性从高到低依次为CaCl_(2)浓度、海藻酸钠质量分数、固定化时间、海藻酸钠与酶质量比,最佳的固定化条件是CaCl_(2)浓度为2 g/L,海藻酸钠质量分数为4%,固定化时间为3 h,海藻酸钠与酶质量比为40 000:1。在该优化工艺条件下,制备的固定化酶凝胶颗粒呈较好的圆整性和均一性,相对酶活力达到最高,为68.53%。该固定化方法具有试验成本低、工艺流程简单、反应条件温和的特点,应用前景较好,并为固定化FuPAL蛋白的制备优化提供了重要的理论基础。

关 键 词：海藻酸钙 暗紫贝母PAL蛋白 暗紫贝母PAL重组酶 固定化 苯丙酮尿症 

分 类 号：Q814.2[生物学—生物工程] S567.231[农业科学—中草药栽培]