双标记选择载体转染牛胎儿成纤维细胞方法的建立  

作　　者：龚国春[1] 戴蕴平[1] 樊宝良[1] 赵春江[1] 王莉莉[1] 王海平[1] 郑敏[1] 李宁[1] 

机构地区：[1]中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北京100094

出　　处：《自然科学进展》2002年第12期1318-1320,共3页

基　　金：北京市重大科技合同项目(990411-01);国家重点基础研究发展规划项目(G20000161)资助

摘　　要：以经SspI和BamHI对所构建的双标记选择载体质粒pCE-EGFP-IRES-Neo-dNdB双酶切后的线性目的DNA为外源基因,对电击介导的牛胎儿成纤维细胞基因转染方法的效率进行了优化.实验结果表明,当电场强度为1.2kV/cm、脉冲时间为1ms时可获得约50个阳性细胞克隆/10 5 个细胞的最佳转染效率.通过牛胎儿成纤维细胞对不同浓度G418抗性的敏感性实验确定800μg/mL G418为快速筛选浓度,以300μg/mL G418为维持筛选浓度.从两个牛胎儿成纤维细胞系中共分离了56个绿色荧光蛋白(GFP)阳性细胞克隆,从中选取2个冷冻保存.经PCR检测,证实2个冷冻克隆株均含有所转染的外源基因.

关 键 词：双标记选择载体 牛胎儿成纤维细胞 电击 基因转染 体细胞克隆 转基因克隆 

分 类 号：Q785[生物学—分子生物学]