伪狂犬病病毒gI/gE双缺失通用转移载体的构建与初步应用  

Construction and application of a Universal Transfer Vector Deleting th e gI and gE of Pseudorabies Virus

作　　者：方六荣[1] 陈焕春[1] 肖少波[1] 马相如[1] 王革非[1] 

机构地区：[1]华中农业大学畜牧兽医学院,湖北武汉430070

出　　处：《中国兽医学报》2003年第1期4-6,共3页Chinese Journal of Veterinary Science

基　　金：国家重点科技攻关资助项目 ( 96 -C0 1-0 4-0 3) ;国家自然科学基金资助项目 ( 39970 5 5 9)

摘　　要：对含伪狂犬病病毒 (pseudorabies virus,PRV) Ea株 g I、g E、11K全基因 ,g D、2 8K基因部分编码区的质粒p SK4.5进行改造 ,消除其中的 Bam H 和 Not 位点 ,将晚期基因 g G的启动子、多克隆位点以及 SV 40 poly(A)同时插入改造后的质粒 p SKBN的 Stu 和 Bst E 位点 ,取代 g I和 g E的部分编码区 ,构建了由 g G启动子驱动的 g I/ g E双缺失通用转移栽体 pg GIE- Uni。序列分析进一步证实 :至少有 8个单一酶切位点可供外源基因直接插入 ,上下游侧翼分别为 0 .8kb和 2 .4kb。将猪繁殖 -呼吸障碍综合征 (兰耳病 )主要抗原基因 ORF5插入 pg GIE- Uni的 Bam H 和 Not 位点之间 ,构建了含 ORF5的转移质粒 pg GIE- ORF5。上述结果为进一步研制猪伪狂犬病 -兰耳病的 2价基因工程疫苗奠定了基础。A recombinant plasmid pSKBN,which was eliminate d the BamHⅠ and NotⅠ sites,was constructed from plasmid pSKB4.5 composing of the gI,gE,11 K genes and partial sequences of gD,28 K genes of Pseudorabies viru s (PRV) Ea strain.The promoter of the glycoprotein G of PRV Ea strain,a poly-link er containing multi-cloning sites(M.C.S.) and SV40 poly(A) singal sequences wer e inserted into the StuⅠ and BstEⅡ sites of plasmid pSKBN,to replace the parti al coding region of gI and gE,resulting in a universal transfer vector pgGIE-Un i which deleting gI and gE at the same time.The results of sequence analyssis sh owed that there were 8 single restrication sites in M.C.S.,enabling the foreign gene inserted directely.The upstream and downstream flanking sequences were up t o 0.8 kb and 2.4 kb respectively.The 0.6 kb fragment containing the ORF5 gene of porcine reproductive respiratory syndrome virus(PRRSV) was further subcloned an d inserted into the pgGIE-Uni,resulting in the transfer plasmid pgGIE-ORF5 exp ressing the ORF5.

关 键 词：伪狂犬病病毒 gI/gE双缺失 通用转移载体 构建 应用 

分 类 号：S852.655[农业科学—基础兽医学] Q782[农业科学—兽医学]