THE CLONING, SEQUENCING AND EXPRESSION OF THE LdMNPV POLYHEDRIN GENE  

舞毒蛾核型多角体病毒多角体蛋白基因的克隆、测序和表达(英文)

作　　者：林同[1] 张传溪[1] 安成才[2] 王志英[3] 刘宽余[3] 苑华毅 

机构地区：[1]浙江大学应用昆虫研究所,杭州310029 [2]北京大学生物技术系,北京100871 [3]东北林业大学森林资源与环境学院,哈尔滨150040

出　　处：《Entomologia Sinica》2002年第4期47-52,共6页中国昆虫科学（英文版）

基　　金：国家自然科学基金项目(30070032);高等学校全国优秀博士学位论文作者专项基金(200055)

摘　　要：LdMNPV-NEFU isolate collected from the forestry farm of Northeast Forestry University was purified and the genomic DNA of LdMNPV was extracted. The LdMNPV polyhedrin gene was cloned by PCR. The results showed that the sequence was an open reading frame (ORF) of 735bp capable of encoding 245 amino acids. The polyhedrin gene sequences of the LdMNPV-NEFU isolate and a Canada strain, LdMNPV-G differed in 5 bases. The polyhedrin gene of the LdMNPV-NEFU isolate contained C, G, T, C and G at 54, 109,379, 508 and 701 sites from the start codon, but the LdMNPV-G isolate contained G, C, C, T and T at the corresponding sites respectively. The same amino acids were encoded by the two ORF sequences, with the exception that Asp and His are encoded by GAC on the polyhedrin gene sequence of the LdMNPV-NEFU isolate and by CAC in the LdMNPV-G isolate. The LdMNPV polyhedrin gene was expressed in E.coli BL21 (DE3) by the pT7-7 plasmid vector.从东北林业大学实验林场采集并纯化了舞毒蛾核型多角体病毒 (LdMNPV -NEFU) ,用蛋白酶K消化 ,提取了病毒基因组DNA。用PCR方法 ,克隆出了该病毒的多角体蛋白 (polyhedrin)基因 ,并对该基因进行了序列测定。结果显示 ,该基因序列是一个含有 735个碱基对的开放阅读框 (ORF) ,该阅读框编码 2 4 5个氨基酸。有 5对碱基与加拿大病毒株LdMNPV G的多角体蛋白基因序列存在差异。LdMNPV NEFU分离株的多角体蛋白基因的第 5 4、10 9、379、5 0 8和 70 1位 (从起始密码子中的A开始 )分别是C ,G ,T ,C和G ,而LdMNPV G分离株的多角体蛋白基因 (ORF)相应位置上的碱基分别是G ,C ,C ,T和T。两个ORF编码的对应位置的氨基酸绝大多数相同 ,只有一对不同 ,即由LdMNPV NEFU编码的天冬氨酸和由LdMNPV G编码的对应位置的组氨酸。以质粒pT7 7为载体 ,多角体蛋白基因在大肠杆菌BL2 1(DE3)菌株中进行了原核表达。

关 键 词：LdMNPV polyhedrin gene CLONE sequence EXPRESSION 

分 类 号：S476.1[农业科学—农业昆虫与害虫防治]