大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因克隆与表达研究  

Cloning and expression of the cDNA of a thrombin-like enzyme from the venom of Gloydius shedaoensis

作　　者：杨青[1] 雷旭宇[1] 许建强[1] 李民[1] 苏志国[2] 安利佳[1] 杨克瑞斯特.杨森 

机构地区：[1]大连理工大学生物工程系,辽宁大连116012 [2]中国科学院化工冶金研究所生物化学工程国家重点实验室,北京100080 [3]瑞典乌普萨拉大学生物医学研究中心,乌普萨拉75123

出　　处：《大连理工大学学报》2003年第2期156-159,共4页Journal of Dalian University of Technology

基　　金：辽宁省科学技术基金资助项目(99305001);瑞典政府NUTEK基金资助项目.

摘　　要：根据同源性设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,并由此推测出其相应的氨基酸序列.将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕氏酵母细胞中获得表达.该表达产物经两步柱层析后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,获得单一条带,并表现较强的生色底物活性.Total RNAs were extracted from the venom gland of the snake Gloydius shedaoensis. The cDNA of defibrase was amplified by RTPCR. Assay of the nucleotide sequence of the cDNA allowed postulation of the complete amino acid sequence for Gloydius shedaoensis. The cDNA of defibrase was inserted into the vector pPIC 9K and expressed in Pichia pastoris, strain GS115.

关 键 词：大连蛇岛 蝮蛇 类凝血酶 基因克隆 基因表达 酵母表达系统 氨基酸序列 蛇毒 

分 类 号：Q959.62[生物学—动物学] Q78