犬2型腺病毒E1转化细胞的建立  

The Establishment of CAV-2 E1 Transformed Cell

作　　者：邱薇[1] 夏咸柱[2] 范泉水[1] 扈荣良[2] 王雷[2] 高玉伟[2] 张守峰[2] 孙阳[1] 杨美峰[1] 

机构地区：[1]成都军区联勤部军事医学研究所,昆明650032 [2]解放军军需大学军事兽医研究所,长春130062

出　　处：《中国生物工程杂志》2003年第4期65-70,共6页China Biotechnology

基　　金：全军"十五"医药卫生重点项目基金资助 ( 0 1 Z 0 92 )

摘　　要：为建立能表达犬 2型腺病毒 (CAV 2 )E1基因的辅助细胞 ,本研究用含CAV 2E1基因的重组质粒pc E1t对DK细胞进行转染 ,经G41 8的筛选 ,得到 2 6个细胞克隆。用CAV 2E1A特异引物对各细胞克隆进行PCR和RT PCR检测 ,PCR结果表明转染后的细胞克隆都能扩增出 5 3 6bp的特异性片段 ,但仅有 6株为RT PCR强阳性 ,能扩增出 6 5 2bp的特异带。再对RT PCR强阳性的细胞克隆进行Westernblot分析 ,最终挑选到一个既能转录E1A基因 ,又能表达E1B 1 9kD蛋白的克隆细胞株 (DK E1 )。To establish the accessory cell which could express the CAV-2 E1gene,an expressing vector containing CAV-2 E1 fragment was used to transform the DK cells.During the screening of G418,several cell clones were obtained.A pair of CAV-2 E1A gene primers were used to test the cell clones by PCR and RT-PCR.Western blot was also used to test the cell clones.At last,only one cell clone which could transcript the E1A gene and express the E1B 19kD protein was screed.;

关 键 词：犬2型腺病毒 E1基因 细胞克隆 表达载体 DK细胞系 

分 类 号：Q813[生物学—生物工程]