结球甘蓝γ-生育酚甲基转移酶cDNA的克隆、分析及其异源表达酶蛋白的功能研究  

作　　者：欧阳青[1] 樊春涛[2] 孙卉[1] 张玉满[1] 白双义[3] 蔡文启[1] 

机构地区：[1]中国科学院微生物研究所,北京100080 [2]北京师范大学生命科学学院,北京100875 [3]中国农业大学园林系,北京100095

出　　处：《自然科学进展》2003年第7期709-715,共7页

基　　金：国家自然科学基金(批准号:30270856)

摘　　要：采用3′-和 5′-RACE技术,从结球甘蓝(Brassica oleracea L.var.capitata L.)幼苗顶芽中克隆了γ-生育酚甲基转移酶的全长cDNA序列(BoTMT),该cDNA长1265bp,包含一个1044bp的开放阅读框,编码包括叶绿体导肽和两个S-腺苷甲硫氨酸结合结构域(SAM-bindng domain)在内的347个氨基酸组成的蛋白质,序列分析表明该蛋白质与目前已知的γ-生育酚甲基转移酶有41.8％～86.5％的同源性,半定量RT-PCR结果显示BoTMT主要在结球甘蓝的花和叶器官中表达,将BoTMT的成熟蛋白编码区序列克隆至原核表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达,表达产物占菌体总蛋白的22％,体外酶活性测定结果表明表达的蛋白质具有γ-生育酚甲基转移酶活性,能有效地催化γ-生育酚甲基化生成α-生育酚。

关 键 词：结球甘蓝 Γ-生育酚甲基转移酶 CDNA序列 基因克隆 基因表达 原核表达 维生素E 体外酶促反应 

分 类 号：Q785[生物学—分子生物学]