真鲷肿瘤坏死因子（TNFα）基因的体外重组与纯化研究  

作　　者：蔡中华[2] 宋林生[1] 高春萍[3] 吴龙涛[1] 邱丽华[1] 

机构地区：[1]中国科学院海洋研究所青岛266071 [2]天津农学院水产科学系天津300384 [3]中国海洋大学学院生命科学学院青岛266003

出　　处：《高技术通讯》2004年第1期25-30,共6页Chinese High Technology Letters

摘　　要：将真鲷肿瘤坏死因子(TNFα)基因的成熟肽区域克隆到表达载体pQE30中，并转化到大肠杆菌XL-blue中进行表达。转化子经载体和基因特异性引物进行PCR双向筛选，并将筛选到的阳性克隆经质粒纯化后，进行序列测定。序列测定结果显示，该基因结构正确，且准确插入到表达载体启动子的下游，获得了结构和组成正确的重组子。重、组子经IPTG诱导后，以SDS-PAGE电泳鉴定，电泳结果表明，该基因在大肠杆菌XL-blue中实现了表达。通过对诱导条件的调整，在体外获得了高效表达的重组蛋白，高效表达的重组蛋白约占菌体蛋白的25％-30％。不同诱导时间对重组蛋白影响实验显示，随诱导时间的增加，重组蛋白产量逐渐增高，经4h诱导，其表达量可以达到平台期，过长时间的诱导，对表达产量没有影响。重组蛋白经镍金属亲和层析纯化，获得了纯度较高的重组蛋白。采用交换缓冲液的方法，用Sephadex G150，对重组蛋白进行脱盐复性，使重组蛋白得到了进一步纯化。

关 键 词：真鲷 肿瘤坏死因子 基因重组 基因纯化 重组蛋白 鱼类 养殖业 病害 体外重组 纯化 

分 类 号：S965.231[农业科学—水产养殖] Q784[农业科学—水产科学]