pGPU6/GFP质粒介导的表达钙网织蛋白基因的短发夹RNA的构建和鉴定  

作　　者：李晓曦[1] 孟凡东[1] 孙大鹏[1] 仇凤启[1] 刘新莉[1] 赵丹[1] 马萍[1] 

机构地区：[1]中国医科大学附属第一医院肿瘤研究所二室,辽宁沈阳110001

出　　处：《中国老年学杂志》2014年第13期3675-3677,共3页Chinese Journal of Gerontology

基　　金：辽宁省科学技术计划立项课题(No.2009225008-1)

摘　　要：目的构建靶向钙网织蛋白(CRT)基因的短发夹RNA(shRNA)表达质粒并鉴定。方法设计并合成4对针对CRT基因的shRNA链,退火形成双链,与酶切的质粒pGPU6/GFP连接,构建4个重质粒,转化DH5а菌株,提取质粒,进行酶切鉴定和测序分析。脂质体法转染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过荧光倒置显微镜判定转染效率,并通过Western印迹法检测细胞中CRT基因及蛋白的表达水平。结果经酶切鉴定筛出的重组质粒测序结果与目的序列相同,重组质粒pGPU6/GFP/Neo-CRT构建成功;转染MDA-MB-231细胞后,CRT基因在mRNA及蛋白水平的表达均降低,其中pGPU6/GFP/CRT1的抑制效果最好。结论成功构建了靶向CRT基因的shRNA表达质粒,并筛选出1种对CRT基因有显著抑制作用的shRNA。

关 键 词：CRT基因 RNA干扰 乳腺癌 

分 类 号：R737.9[医药卫生—肿瘤]