蛋白激酶SGK3基因的克隆及其在乳腺癌细胞中的表达  

作　　者：郭红艳[1] 孙晓杰[1] 李淑艳[1] 刘秀财[1] 刘波[2] 王宏兰[1] 蒋瑞雪[3] 

机构地区：[1]齐齐哈尔医学院生物化学教研室,黑龙江齐齐哈尔161006 [2]齐齐哈尔医学院第三附属医院 [3]齐齐哈尔医学院病原实验室

出　　处：《中国老年学杂志》2015年第15期4187-4189,共3页Chinese Journal of Gerontology

基　　金：齐齐哈尔市科学技术计划项目(SFGG-201337)

摘　　要：目的探讨通过克隆蛋白激酶(SGK)3基因并将其转染乳腺癌MCF-7细胞建立高表达SGK3的MCF-7细胞系的稳态性。方法利用真核表达载体N-端增强型绿色荧光蛋白(p EGFP-N1)通过基因克隆技术构建重组质粒,通过菌落PCR和DNA测序方法对重组质粒进行鉴定。通过PEI介导将重组质粒p EGFP-N1-SGK3转染至乳腺癌MCF-7细胞中,荧光显微镜和Western印迹方法对基因转染效率以及融合蛋白GFP-SGK3的表达进行鉴定。结果成功构建了真核表达质粒,将其命名为p EGFP-N1-SGK3;在荧光显微镜下可见多数细胞发出绿色荧光,表明获得了较高的转染效率;Western印迹结果显示,在转染p EGFP-N1-SGK3的细胞中可见阳性条带,而MCF-7亲本细胞和转染空载体的对照组细胞无阳性条带。结论成功构建了重组质粒p EGFP-N1-SGK3,获得了稳定表达融合蛋白GFP-SGK3的MCF-7细胞系,可用于后续SGK3细胞内功能的研究。

关 键 词：糖皮质激素调节蛋白激酶3 基因克隆 乳腺癌 

分 类 号：R737.9[医药卫生—肿瘤]