MEK转染的内皮细胞表达人内皮细胞特异性分子-1的初步研究  

作　　者：张素梅[1] 汪渊[1] 

机构地区：[1]安徽医科大学

出　　处：《安徽医科大学学报》2004年第1期73-73,共1页Acta Universitatis Medicinalis Anhui

摘　　要：目的　人内皮细胞特异性分子 1(Humanendocellular specificmolecule 1,ESM 1)表达载体的构建及其体外表达 ,表达产物的纯化及多克隆抗体和单克隆抗体的制备。重组MEK基因的真核转染 ,转染的内皮细胞中ESM 1的表达。方法　用PCR方法扩增ESM 1的基因片段 ,扩增产物与T Vector连接 ,构建克隆载体 pGEM T ESM 1。在宿主菌中扩增重组质粒 ,提取质粒并进行酶切纯化 ,将目的基因插入pET 2 8b中构建成表达载体 ,再次转化入大肠杆菌XL1 blue ,蓝白选择、耐药性标记粗筛并挑取阳性克隆 ,经限制性内切酶酶谱分析、DNA序列分析两种方法鉴定。然后提取质粒 ,转化入大肠杆菌BL 2 1,用IPTG诱导表达。表达产物行SDS PAGE ,割下所需条带 ,用电洗脱方法纯化得到所需目的蛋白。免疫新西兰纯种大白兔 ,制备多抗 ,并用免疫双扩散法测定抗体效价 ;免疫BALB/C小鼠 ,制备抗人ESM 1的单克隆抗体。用重组MEK()基因转染人脐静脉内皮细胞ECV30 4 ,加以鉴定 ,并检测转染细胞中ESM 1表达的改变。结果　经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证明所构建质粒为 pET - 2 8b -ESM - 1重组质粒 ,SDS -PAGE证实获得的融合蛋白分子量为 2 4ku ,表达量约占菌体总蛋白的 2 4 %。所得多抗效价为 1:16 (免疫双扩散 ) ,单抗效价为 1:6 0 0 0

关 键 词：MEK 基因转染 人内皮细胞特异性分子-1 多克隆抗体 单克隆抗体 基因表达 

分 类 号：R394[医药卫生—医学遗传学]