SOEing法在构建人瘦蛋白乳腺表达载体中的应用  

SOEing in Constructing Mammary Gland Expression Vector of Human Leptin

作　　者：刘金龙[1] 刘津[1] 杨瑞锋[1] 张涌[1] 

机构地区：[1]西北农林科技大学生物工程研究所,杨凌712100

出　　处：《中国生物工程杂志》2004年第6期90-92,97,共4页China Biotechnology

基　　金：国家"8 63"计划资助项目 ( 2 0 0 1AA2 13 0 81)

摘　　要：目的 :将奶牛CSN2 5′端启动子区与人瘦蛋白cDNA序列进行拼接 ,进而构建人瘦蛋白乳腺特异性表达载体。方法 :设计特殊的“巨型引物” ,运用PCR方法分别从质粒pBBC和pHL上扩增了牛CSN2 5′端启动子 ( 2 8kb)和有完整读码框的人瘦蛋白基因。利用改进的重叠区扩增基因拼接法 (SOEing法 ) ,将两个独立的片断进行了拼接。结果 :得到了两者线形融合基因 。Object: Bovine CSN2 5′promoter region and human leptin cDNA are spliced to construct mammary gland expressing vector of human leptin. Methods: Design a pair of special “huge primers' and use PCR to amplify bovine CSN2 5′promoter region(2.8kb) and human leptin cDNA with complete coding region from plasmid pBBC and pHL respectively. And use modified SOEing program to splice these two independent segments. Result: bovine CSN2 5′promotor region and human leptin cDNA are spliced prosperously and producing a linear fused gene,which is the vital basis for the construction of mammary gland expressing vector of human leptin.

关 键 词：SOEING 人瘦蛋白 乳腺 表达载体 启动子 奶牛 重叠区扩增基因拼接法 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学] Q51