浙江省科技计划项目(2004C22044)

作品数：6被引量：33H指数：3
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重组NP蛋白抗原检测SIV抗体间接ELISA方法的建立被引量：1
《浙江农业学报》2008年第6期408-413,共6页王方昆 袁秀芳 刘思当 张存 徐丽华 王一成 
浙江省科技计划重点项目(2004C22044)
用纯化的H9N2亚型猪流感可溶重组NP蛋白作为包被抗原,建立了检测猪流感抗体的间接ELISA方法。ELISA的最佳工作条件是:抗原包被浓度为12.5μg/mL,37℃1 h,4℃过夜;血清稀释度为1∶40;酶标SPA稀释度为1∶10 000,37℃温育40 min,底物显色37...
关键词：猪流感 重组NP蛋白 ELISA 
猪胸膜肺炎放线杆菌apx Ⅳ表达蛋白单克隆抗体的制备被引量：1
《浙江农业科学》2008年第6期771-773,共3页袁秀芳 徐丽华 王一成 张存 叶伟成 
浙江省科技计划重点项目(2004C22044)
将APP apx Ⅳ N端基因克隆于pET-28a载体中,转化大肠杆菌,并进行诱导表达。收获融合表达的apx Ⅳ蛋白,按50μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化后,经腹腔接种BALB/C小鼠,免疫3次后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,用apxⅣ表达蛋白作...
关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 单克隆抗体 杂交瘤株 apxⅣ 
H9N2亚型猪流感病毒NS1基因的克隆表达及反应原性分析被引量：3
《中国农业科学》2008年第2期587-592,共6页王方昆 袁秀芳 王一成 张存 徐丽华 刘思当 
浙江省科技计划重点项目(2004C22044)
【目的】对H9N2亚型猪流感病毒NS1(nonstructural protein1)基因进行原核表达,获得纯化表达产物,以期为检测猪流感抗体的ELISA试剂盒的研制奠定基础。【方法】采用RT-PCR扩增了猪流感病毒(H9N2)的NS1基因,将其克隆于表达载体pET-28a(+)...
关键词：猪流感病毒 NS1基因 反应原性 
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ毒素基因的克隆与表达被引量：14
《中国兽医学报》2007年第5期657-660,共4页王方昆 王一成 袁秀芳 徐丽华 
浙江省科技计划重点资助项目(2004C22044)
以猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清2型标准菌株基因组DNA为模板,用PCR方法扩增ApxⅣ毒素基因特异片段1.5 kb左右,将PCR产物纯化后与pMD18-T连接并测序,结果该片段的碱基序列与GenBank中标准株序列的同源性为98%。随后将该片段亚克隆...
关键词：猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅣ 克隆 表达 
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌APX Ⅱ基因特异片段的克隆和表达被引量：3
《浙江农业学报》2007年第1期6-10,共5页袁秀芳 王一成 徐丽华 张存 叶伟成 
浙江省科技计划重点项目(2004C22044)
将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌APXⅡ的一段毒素基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,经鉴定后得到重组质粒pET-APXⅡ,并将其转化到受体菌BL21中,诱导剂IPTG进行诱导表达,4 h后达到高峰。经12%SDS-PAGE电泳检测,表达得到的融...
关键词：猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 克隆 表达 Westemblotting 
猪流感诊断方法研究进展被引量：12
《动物医学进展》2006年第4期17-21,共5页王方昆 王一成 袁秀芳 徐丽华 
浙江省科技计划重点项目(2004C22044)
猪流感即猪流行性感冒,是由正黏病毒科A型流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病。其特征为突发,高热,精神沉郁,食欲废绝,呼吸困难,阵发性咳嗽。猪流感的病死率不高,病猪可康复。近年来,随着集约化养猪规模的不断扩大,猪流感对养猪业构成...
关键词：猪流感 诊断 
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