刘志刚

作品数：24被引量：71H指数：5
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供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
发文主题：单链抗体CHO细胞基因表达CHO尿激酶更多>>
发文领域：生物学医药卫生化学工程更多>>
发文期刊：《生物化学与生物物理进展》《生物技术通讯》《细胞与分子免疫学杂志》《军事医学》更多>>
所获基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
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基于CHO细胞定点整合技术的新型抗体呈现系统的构建
《军事医学》2012年第8期608-612,625,共6页何阳阳 刘敏 李春 张畅 孙志伟 刘志刚 王双 庞晓斌 
目的建立一个以CHO定点整合系统为基础的高通量抗体筛选平台,筛选获得抗VEGF高亲和力突变体抗体。方法设计并构建了基于CHO细胞定点整合系统的通用minibody展示载体,将3株亲和力已知的抗VEGF抗体(A6,A63,A657)和1个抗VEGF轻链抗体库分...
关键词：抗体库 CHO细胞 展示系统 高通量筛选 抗VEGF特异性抗体 
利用同源重组建立CHO高表达细胞株
《军事医学科学院院刊》2007年第3期237-242,共6页邵炜 刘志刚 俞炜源 
国家高技术研究发展计划("863"计划)资助项目(2001AA215351)
目的:利用同源重组的方法,克服基因组位置效应,建立CHO高表达细胞株。方法:通过弱化筛选基因,构建了一系列弱化筛选基因的载体,大规模筛选CHO基因组,寻找转录活跃区,并在此基础上构建同源重组载体系统,包括标记载体pExplorer和打靶载体p...
关键词：基因表达 转录活跃区 同源重组 CHO/dhfr^- 
CHO/dhfr^-细胞定点整合高效表达系统的建立被引量：6
《生物工程学报》2007年第4期756-762,共7页周宏 刘志刚 孙志伟 俞炜源 
国家高技术"863"计划基金资助(No2001AA215351)~~
为了克服随机整合建立高表达细胞株时“位置效应”所带来的不可预知的后果,我们尝试建立基于定点整合的CHO高效表达系统。首先设计一个新的高效筛选载体pMCEscan。该载体含有报告基因(k2tPA)、扩增基因(dhfr)、重组酶识别序列(FRT)及筛...
关键词：CHO细胞 定点整合 高效表达 重组蛋白 
克服位置效应提高外源基因在CHO细胞中稳定高效表达的策略被引量：3
《生物技术通讯》2006年第6期945-949,共5页周宏 刘志刚 俞炜源 
能够生产有功用的治疗性蛋白的一个重要前提是获得稳定的重组蛋白高表达细胞株,然而筛选一个能够持续稳定表达外源蛋白的重组细胞株是费时费力的过程。有多篇文献报道了重组蛋白细胞株表达的不稳定性。位置效应是高表达细胞株不稳定性...
关键词：CHO细胞 稳定性 重组蛋白 高效表达 
哺乳动物细胞高效表达载体的优化被引量：2
《生物技术通讯》2006年第5期692-695,共4页张国强 刘志刚 刘珊 俞炜源 
国家高技术研究发展计划项目(2001AA215351)
目的:优化哺乳动物细胞表达系统,提高目的基因的表达效率。方法:以组织型纤溶酶原激活剂(tPA)为报告基因,利用本实验室建立的CHOfrt/dhfr-细胞定点整合表达系统,对多种表达调控元件(包括hCMV和hEF-1α启动子、hCMV增强子、hEF-1α1st内...
关键词：CHO-dhfr^-细胞 表达调控元件 优化 表达载体 
CHO细胞高效表达载体的优化被引量：1
《军事医学科学院院刊》2006年第4期301-305,共5页刘珊 刘志刚 张国强 俞炜源 
国家高技术研究发展计划("863"计划)资助项目(2001AA215351)
目的:研究分析中国仓鼠EF1-α基因的转录调控序列,以构建新型高效表达载体。方法:利用常规分子生物学技术,构建了一系列基于CHEF1-α基因的非翻译区调控序列元件的新型真核表达载体。以组织型纤溶酶原激活剂突变体(k2tPA)作为报告基因,...
关键词：CHEF1—α基因 CHO/dhfr^-细胞 基因表达 组织型纤溶酶原激活物 
基于DNA的Semliki森林病毒复制子载体体内外高水平表达外源基因被引量：9
《生物化学与生物物理进展》2006年第1期87-94,共8页余云舟 孙志伟 刘志刚 俞炜源 
基于DNA的复制子载体显著地提高了复制子载体的应用范围,在体外可用于高水平表达外源基因,大规模制备重组病毒颗粒,在体内可用于复制子疫苗和基因治疗载体研究.将复制子RNA的cDNA置于RNA聚合酶Ⅱ启动子和转录终止子控制下时,基于RNA的...
关键词：semliki森林病毒 RNA复制子 DNA 重组病毒颗粒 疫苗 
定点整合人Bcl-2基因的CHO/dhfr-细胞株的建立被引量：1
《生物技术通讯》2005年第6期605-608,共4页许凌峰 刘志刚 孙志伟 林建波 杜韫 刘姗 俞炜源 
构建重组载体质粒pMCEfrt-Bcl-2,利用FIp-InTM定点重组系统,在CHO-dhfr-细胞内定点整合人Bcl-2基因,通过Western印迹检测重组细胞Bcl-2蛋白的表达。通过流式细胞仪和DNALadder检测在高NH4Cl条件下细胞的凋亡情况;用台盼蓝染色检测在无血...
关键词：CHO/dhfr^-细胞 BCL-2基因 细胞培养 凋亡 
proUK-KGDW融合基因在CHO细胞中的高表达被引量：2
《生物技术通讯》2005年第4期384-386,共3页杜韫 刘志刚 林建波 徐桂清 俞炜源 
国家自然科学基金项目(30171100)
利用常规分子生物学技术,构建了新型高效的proUK-KGDW融合基因的分泌型哺乳动物细胞表达载体。将该载体线性化后转染CHO/dhfr-细胞,经G418筛选获得阳性克隆,然后挑取表达水平较高的克隆进行MTX加压扩增,以提高proUK-KGDW杂合体的表达水...
关键词：proUK—KGDW融合基因 CHO/dhfr^-细胞 重组蛋白 高表达 
重组单链抗体-低分子质量尿激酶融合蛋白在CHO细胞中的抗降解研究被引量：5
《生物化学与生物物理进展》2005年第6期544-550,共7页刘志刚 林建波 杜韫 俞炜源 
国家高技术'863'计划资助项目(2001AA215351)~~
抗人纤维蛋白单链抗体-低分子质量尿激酶(IIn-UK)融合蛋白,兼有单链抗体对纤维蛋白的亲和性和尿激酶的溶栓活性,有望开发成为新型导向溶栓药物.但基于通用连接肽(G4S)3的IIn-linker-UK融合蛋白在CHO细胞中表达时出现明显的降解.为了解...
关键词：融合蛋白 连接肽 降解 CHO细胞 
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