小麦Ra3基因编码区的克隆、原核表达及纯化  

Cloning,prokaryotic expression and purification of Ra3's encoding region in wheat

作　　者：杨宇衡[1] 赵金阳[1] 唐如春[1] 魏少华[1] 范三红[1,2] 

机构地区：[1]西北农林科技大学生命科学学院 [2]西北农林科技大学陕西省农业分子生物学重点实验室,陕西杨凌712100

出　　处：《西北农林科技大学学报（自然科学版）》2010年第3期89-94,共6页Journal of Northwest A&F University(Natural Science Edition)

基　　金：国家转基因专项“高产转基因小麦新品种培育”(2008ZX08002-003);西北农林科技大学青年科学基金项目(QN2009070);西北农林科技大学青年学术骨干支持计划项目

摘　　要：【目的】克隆小麦ramosa3(Ra3)基因完整编码区,利用原核表达系统表达并纯化获得重组的小麦RAMOSA3(RA3)。【方法】利用RT-PCR技术,从普通小麦"中国春"幼穗中扩增小麦Ra3,将其重组到原核表达载体pET-41a,并在T7Express competentE.coli菌株中进行诱导表达;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化获得重组蛋白,并通过Western印迹技术对其进行鉴定。【结果】获得了长度为1080bp的cDNA片段,该片段包含小麦Ra3完整编码区,编码产物长度为360个氨基酸残基,属于TPP酶家族成员;SDS-PAGE结果显示,菌体总蛋白中出现约66ku的预期条带,其表达量占总蛋白的44.6%;抽提液中加入体积分数0.3%的Triton X-100,可显著提高重组蛋白的溶解度;纯化后的重组蛋白呈单点纯,Western印迹结果进一步确证其为目标蛋白。【结论】利用原核系统高效表达并纯化获得了重组的小麦RA3。[Objective] The study cloned the encoding region of wheat ramosa3 and obtained this protein by expression and purification in prokaryotic system.[Method] The cDNA of wheat Ra3 was amplified from young spike of common wheat Chinese Spring by RT-PCR;expression vector pET-41a was constructed,and fusion protein was expressed in E.coli strain T7 Expression;the recombinant protein was purified by Ni-NTA resin column and identified by western blot analysis.[Result] A length of 1 080 bp of cDNA fragment was obtaine...

关 键 词：小麦 ramosa3 同源克隆 重组表达 亲和纯化 

分 类 号：S51[农业科学—作物学]