基于PCR技术筛选cDNA和genome文库方法的改进  

作　　者：程旭东[1] 董玲丽[1] 凌宏清[1] 

机构地区：[1]中国科学院遗传与发育生物学研究所植物细胞与染色体工程国家重点实验室，北京100101

出　　处：《高技术通讯》2004年第11期32-37,共6页Chinese High Technology Letters

摘　　要：提出一种改进的基于PCR技术的cDNA和genome文库筛选新方法。该方法利用PCR手段逐步排除文库中的非阳性克隆组分，提高阳性克隆所占比重，最后得到含有一定数量阳性单克隆的最小克隆群体用于直接挑选单个阳性克隆。在筛选cDNA文库时则增加了一个将噬菌体文库转化成质粒文库的步骤。该方法既保留了常规PCR文库筛选方法的灵敏、快捷和经济的特点，又弥补了其筛选周期相对较长、工作量大，以及随着循环数的增加和提取DNA的难度加大，阳性克隆容易丢失等缺陷，尤其在用于筛选cDNA文库时更是免除了繁琐的滴度、侵染和洗脱过程，极大地提高了筛选的成功率。

关 键 词：CR技术 文库筛选 cDNA文库 文库 滴度 PCR 单克隆 阳性克隆 循环数 质粒 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学] R814[医药卫生—影像医学与核医学]