灭活病毒诱导牙鲆传代细胞差减cDNA文库的构建及分析  

Construction and Analysis of the Subtractive cDNA Library of Flounder Cells Induced with Inactive Fish Rhabdovirus

作　　者：杜昌升[1] 张奇亚[1] 董彩文[1] 苗大利[1] 桂建芳[1] 

机构地区：[1]中国科学院水生生物研究所,淡水生态与生物技术国家重点实验室,武汉,430072

出　　处：《高技术通讯》2005年第1期79-82,共4页Chinese High Technology Letters

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)，国家自然科学基金，中国科学院科研项目，中国科学院水生生物研究所项目

摘　　要：以灭活大鳞鲆弹状病毒诱导的牙鲆(Paralichthys olivaceus)传代细胞作为检测子(tester),正常对照细胞作为驱赶子(driver),分别提取mRNA,逆转录合成双链cDNA.经两轮差减杂交,两轮抑制性PCR扩增后,取正向差减的PCR产物与T载体连接,构建抑制差减cDNA文库,随机挑取7400余个克隆,对其中4200多个克隆进行PCR扩增鉴定,发现近4000个克隆中均含有插入片段,大小在250～1000bps之间,进一步对含有插入片段的近4000个克隆进行了斑点杂交筛选,得到近668个可能含有抗病毒或与免疫相关的阳性克隆.初步的结果表明所建立的差减cDNA文库适合进一步克隆鱼类抗病毒相关新基因.

关 键 词：灭活病毒 诱导 克隆 cDNA文库 抗病毒 传代细胞 免疫相关 牙鲆 差减杂交 PCR扩增 

分 类 号：R446[医药卫生—诊断学] R392[医药卫生—临床医学]