短发夹RNA介导RNA干涉的实验学控制研究  

Experimental controls on RNA interference mediated by short hairpin RNA

作　　者：何国平[1] 张思仲[1] 马用信[1] 肖翠英[1] 许文明[1] 孙岩[1] 丁兰[1] 张炜[1] 陶大昌[1] 陈玉娟[1] 

机构地区：[1]四川大学华西医院医学遗传学研究室、人类疾病基因组学研究室、人类疾病生物治疗国家重点实验室,成都,610041

出　　处：《高技术通讯》2005年第3期64-70,共7页Chinese High Technology Letters

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划)，国家自然科学基金

摘　　要：采用载体介导的RNA干涉 (RNA interference,RNAi)技术抑制HEK293H细胞中外源报告基因的表达,并设置一系列的实验学控制以探讨其在RNAi应用研究中的价值及意义.运用pAVU6+27,构建了针对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的一系列短发夹RNA表达载体,并用脂质体法转染于HEK293H细胞中,检测EGFP mRNA及蛋白表达水平.瞬时转染48h后, RT-PCR及Western blot结果表明,针对EGFP三个靶点的干涉质粒均不同程度地抑制细胞内EGFP的表达,但仅转录正反义链、链内1-2个碱基错配的干涉载体不能介导特异的RNAi效应.此外,共转染实验结果表明干涉质粒两两间无相互增强或抑制的RNAi效应.在此基础上,通过G418筛选生成了HEK293H EGFP稳定表达株,在转染后不同时间点检测EGFP mRNA及蛋白表达变化,发现RNAi 效应在一定时间范围内呈现明显的时间依赖性.这些结果表明,有效的实验控制在RNAi研究中十分必要,具有重要的参考价值.基于载体表达的RNAi作用呈现明显的时间依赖性效应,为RNAi应用研究提供了一定的参考及借鉴价值.

关 键 词：短发夹RNA 介导 EGFP 转染 蛋白表达 实验 抑制 RNA干涉 碱基错配 细胞 

分 类 号：R735[医药卫生—肿瘤] Q78[医药卫生—临床医学]