正交法用于真菌微卫星PCR体系优化  

Optimization of SSR-PCR reaction system in fungus by orthogonal design

作　　者：杨艳秋[1] 贺丹[1] 王爽[1] 郭亮[1] 张宇[1] 横山耕治[2] 王丽[1] 

机构地区：[1]吉林大学基础医学院病原生物学教研室 [2]日本国立千叶大学真菌医学研究中心

出　　处：《吉林大学学报（医学版）》2006年第6期1108-1111,共4页Journal of Jilin University：Medicine Edition

基　　金：国家自然科学基金资助课题(30571773);吉林省科技厅科技发展计划重点项目资助课题(20050205-3)

摘　　要：目的:探讨影响真菌微卫星聚合酶链反应(SSR-PCR)的多个因素,建立PCR的最佳反应体系,为进一步进行真菌的鉴定、遗传多样性研究奠定基础。方法:利用正交设计,从Taq DNA聚合酶、模板DNA、dNTP、引物4种因素,对真菌微卫星反应体系进行优化分析,并确定PCR适宜的退火温度及循环次数。结果:各因素的不同水平对PCR结果都有显著影响,其中模板DNA影响最大。在PCR反应体系中(25μL),Taq DNA聚合酶1U,模板DNA 30 ng,dNTP 150μmol.L-1,引物0.25μmol.L-1为最佳。结论:采用正交法实验设计,对真菌微卫星PCR体系优化更科学,得出的实验体系有效范围宽,且高效、快捷。

关 键 词：真菌 微卫星重复 聚合酶链反应 正交法 

分 类 号：R379[医药卫生—病原生物学]