溶藻弧菌抗独特型抗体单链抗体基因真核表达载体的构建  

作　　者：付建芳[1] 黄威权[2] 秦红[2] 金晓航[2] 杨安钢[3] 

机构地区：[1]第四军医大学西京医院内分泌科 [2]第四军医大学基础部组织胚胎学教研室,陕西西安710032 [3]第四军医大学基础部免疫学教研室,陕西西安710032

出　　处：《细胞与分子免疫学杂志》2007年第8期767-768,771,共3页Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)资助项目(2001AA622040)

摘　　要：目的:构建溶藻弧菌抗独特型抗体的单链抗体(scFv)基因的毕赤酵母分泌型表达载体。方法:从分泌溶藻弧菌抗独特型抗体的杂交瘤细胞株(2F4)中克隆该抗体的重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因(GenBank acces-sion No:DQ011530和DQ011531),并通过基因重组为scFv基因。然后将其克隆入毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K中,经序列测定后,电转化入毕赤酵母菌SMD1168中,将经表型筛选和G418抗性筛选的重组酵母菌株进行PCR鉴定。结果:获得毕赤酵母菌分泌型表达载体pPIC9K-scFv,经G418浓度梯度筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母菌株。结论:成功地构建溶藻弧菌抗独特型抗体的scFv基因的真核表达载体,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。

关 键 词：溶藻弧菌 单链抗体 真核表达 毕赤酵母菌 

分 类 号：Q812.3[生物学—生物工程]