胎儿弯杆菌表面蛋白(SapA)基因的分段表达及其免疫原性分析  

Expression of surface layer proteins (SapA) gene from Campylobacter fetus

作　　者：赵海玲[1,2] 刘思国[1] 刘慧芳[1] 王春来[1] 司微[1] 杜艳芬[1] 杨金国[1,3] 林靖凯[1,4] 

机构地区：[1]中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室／动物细菌病研究室,黑龙江哈尔滨150001 [2]内蒙古农业大学动物科学与医学学院,内蒙古呼和浩特010018 [3]吉林农业大学,吉林长春130118 [4]广西大学,广西南宁530004

出　　处：《中国预防兽医学报》2008年第11期842-845,共4页Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine

基　　金：国家“十一五”科技支撑计划项目(2007BAD40B01)

摘　　要：应用PCR方法扩增出胎儿弯杆菌表面蛋白基因(SapA)的2个基因片段SapA-N(1398bp)和SapA-C(1422bp),采用DNA重组技术,将2个基因片段分别连接于表达载体pET32a(+),并在大肠杆菌中诱导表达(rSapA-N和rSapA-C),用金属鳌合层析的方法纯化蛋白。以Western blot检测重组蛋白的免疫学活性,ELISA试验分析2种蛋白用于胎儿弯杆菌病血清学诊断的可能性。结果表明,以可溶形式表达的2部分蛋白分子量大小约66ku,与预期大小相符。纯化的蛋白均具有良好的免疫学活性,但蛋白rSapA-N比蛋白rSapA-C的免疫学活性高,rSapA-N具有良好的胎儿弯杆菌病血清学诊断的应用价值。The surface layer proteins SapA-N （1 398 bp） and SapA-C （1 422 bp） of Campylobacter fetus were PCR amplified from Campylobacter fetus 553 strain, cloned and expressed in a E.coli express system. The expressed proteins were identified by SDS-PAGE and analyzed by Western blot and ELISA. The results showed that the recombinant protein had a MW of 66 ku protein and were mostly expressd in soluble form. SDS-PAGE and ELISA showed the protein could be recognized by sera from campylobacter fetus infected bovines. The specific immunogenicity of protein SapA-N is higher than the SapA-C.

关 键 词：胎儿弯杆菌 表面蛋白基因(SapA) 原核表达 纯化 ELISA 

分 类 号：S852.618[农业科学—基础兽医学]