重组PDOR基因的表达与纯化及部分酶学性质  

Expression,Purification and Characterization of 1,3-Propanediol Oxidoreductase from Klebsiella pneumoniae

作　　者：罗菊香[1] 王晓霞[1] 方柏山[1] 夏启容[1] 

机构地区：[1]华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室,福建泉州362021

出　　处：《华侨大学学报（自然科学版）》2009年第2期166-170,共5页Journal of Huaqiao University(Natural Science)

基　　金：国家重点基础研究发展(973)计划项目(2007CB707804);国家自然科学基金资助项目(20446004;20676048);福建省科技计划重点项目(2003I020)

摘　　要：将dhaT在E.coliBL21(DE3)pLysS中进行表达,并对含有His6标记的1,3-丙二醇氧化还原酶(PDOR)进行纯化.重组PDOR反应的最适pH值为10.0,最适温度为55℃,其以1,3-丙二醇和NAD+为底物的表观米氏常数Km值分别是15.5,0.23 mmol.L-1.实验表明,Ca2+,Mg2+和Cu2+对酶活性有抑制作用,而Fe2+,Na+,NH4+和Mn2+对酶活性有促进作用;1,3-丙二醇是PDOR适合的氧化底物.The dhaT gene was expressed with protein in E. coli BL21（DE3）pLysS and the His6-tagged 1,3-propanediol oxidoreductase （PD（）R） was purified. Optimal pH and temperature for purified enzyme were 10.0 and 55 ℃ respectively. The apparent Km values of the enzyme for 1, 3-propanediol and NAD^＋ were 13.5 and 0. 25 mmol · L^-1, respectively. The enzyme could be inhibited by metal ions including Ca^2＋ , Mg^2＋ and Cu^2＋ , while increased by Fe^2＋ Na^＋ , NH4^＋ and Mn^2＋ PDOR showed high specificity for the alcohol substrate.

关 键 词：1 3-丙二醇氧化还原酶 基因表达 纯化 酶学性质 

分 类 号：Q814[生物学—生物工程] Q786