ePNP自杀基因载体的构建及其表达  

Vector Construction and Expression of E.Coli PNP Suicide Gene

作　　者：李克强[1] 李文林[2,3] 饶泽昌[3] 赵林[3] 刘东海[1] 唐洪林[3] 石小玉[2] 

机构地区：[1]宁波市第二医院,浙江宁波315000 [2]南昌大学医学院,江西南昌330006 [3]江西省医学科学研究所医学生物高技术重点实验室,江西南昌330006

出　　处：《肿瘤学杂志》2009年第4期303-305,共3页Journal of Chinese Oncology

基　　金：浙江省自然科学基金资助项目(Y206897);宁波市自然科学基金资助项目(2006A610055)

摘　　要：[目的]构建稳定表达ePNP(E.coliPNP)的细胞模型,为肿瘤的基因治疗提供实验基础。[方法]提取大肠杆菌E.coliK12总DNA,PCR方法克隆大肠杆菌ePNP基因,构建逆转录病毒载体质粒pMSCV-ANGPTL4,鉴定测序。脂质体法将三种逆转录病毒载体pMSCV-ANGPTL4、pVSV、pGAG-POL共转染293-EBNA包装细胞,获得高滴度病毒并感染MDA-MB435细胞。荧光显微镜与RT-PCR检测MDA-MB435细胞ePNP基因的表达。[结果]所克隆的ePNP基因与文献报道一致;成功构建了pMSCV/ePNP重组逆转录病毒载体;ePNP基因在MDA-MB435细胞中获得稳定表达。[结论]pMSCV/ePNP自杀基因载体的成功构建及其表达为ePNP应用于肿瘤基因治疗奠定了基础。

关 键 词：嘌呤核苷磷酸化酶 自杀基因 重组逆转录病毒载体 大肠杆菌 

分 类 号：R730.23[医药卫生—肿瘤]