针对人β-catenin基因shRNA真核表达载体的构建与鉴定  

Construction and identification of shRNA eukaryotic vector targeting human β-catenin

作　　者：姜永光[1] 赵佳晖[1] 吴春婷[2] 罗勇[1] 贺大林[3] 

机构地区：[1]首都医科大学附属北京安贞医院泌尿外科,北京100029 [2]首都医科大学附属北京安贞医院呼吸科,北京100029 [3]西安交通大学医学院第一附属医院泌尿外科,西安710061

出　　处：《第二军医大学学报》2009年第8期965-967,共3页Academic Journal of Second Military Medical University

基　　金：国家自然科学基金(30872934);北京市自然科学基金(5072019)~~

摘　　要：目的:构建针对人β-catenin基因mRNA的shRNA真核表达载体,并转染HEK-293细胞,观察其对β-catenin的抑制效应。方法:化学合成用于产生针对β-catenin shRNA的对应DNA片段,将合成的寡核苷酸链退火形成双链,克隆入pSU-PER真核表达载体,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定,筛选阳性克隆。通过脂质体介导,把重组质粒转染HEK-293细胞,RT-PCR、蛋白质印迹法检测其对β-catenin mRNA和蛋白的干涉效果,MTT比色法检测β-catenin基因表达抑制的细胞和对照组细胞的增殖。结果:RT-PCR和蛋白质印迹法检测结果显示转染组β-catenin基因的表达水平下调,MTT检测显示β-catenin表达抑制的细胞光密度值下降,细胞增殖受到了抑制(P<0.01)。结论:成功构建了针对人β-catenin基因的shRNA载体,转染HEK-293细胞后可抑制β-catenin基因的表达。

关 键 词：Β-连环素 RNA干扰 SHRNA HEK 293细胞 上皮细胞间质转化态 

分 类 号：R73-36[医药卫生—肿瘤]