单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳分型技术的内切酶质量评估  

Assessment on the quality of restriction endonuclease in typing Listeria monocytogenes with pulsed-field gel electrophoreses

作　　者：付萍[1] 裴晓燕[1] 杨洋[1] 郭云昌[1] 

机构地区：[1]中国疾病预防控制中心营养与食品安全所,北京100021

出　　处：《卫生研究》2010年第3期368-373,共6页Journal of Hygiene Research

基　　金：全国污染物监测网及食源性病原菌监测网项目

摘　　要：目的对单核细胞增生李斯特菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型的相关影响因素进行分析和探讨,并建立该菌的PFGE双酶切技术。方法分别利用限制性内切酶AscⅠ和ApaⅠ对1/2a、1/2b、1/2c、3a和4b型的单核细胞增生李斯特菌进行PFGE分析(包括1种品牌的AscⅠ和5种品牌的ApaⅠ),通过指纹图谱的比较,优化各种内切酶的实验参数。结果AscⅠ酶切产生11条左右清晰的DNA指纹图谱条带,ApaⅠ酶切产生的条带数量与之相似,但其中约10%的菌株(1/2a、1/2b血清型)均产生消化不完全的DNA片段。同时用5种品牌的ApaⅠ酶消化,并改变消化温度、提高酶浓度、延长酶消化时间均无法克服此现象。结论AscⅠ酶适于1/2a、1/2b、1/2c、3a和4b血清型的单核细胞增生李斯特菌的分型,但ApaI酶适于多数1/2a和1/2b血清型的分型。Objective To study the relative effective factors of PFGE typing methods of Listeria monocytogenes,and set up this PFGE method of this pathogen digested with AscⅠ and ApaⅠ.Methods Listeria monocytogenes isolates（including 1 /2a,1 /2b,1 /2c,3a and 4b serovars） from food in China were digested with one brand of Asc I and 5 different brands of Apa Ⅰ.The better test parameters were studied by the fingerprint patterns.Results Digestion with Asc I yielded about 11 distinct fragments,and ApaⅠ yielded similar number of fragments.However,ten percent of strains（1 /2a、1 /2b serovars） showed partial digestion with all these brands of restriction endomuclease ApaⅠ,including different enzyme concentration,different temperature and different digestion time.Conclusion AscI was suitable for digestion of all these Listeria monocytogenes isolates（1 /2a、1 /2b、1 /2c、3a and 4b serovars）,but ApaⅠ was suitable for most of the isolates（1 /2a、1 /2b）.

关 键 词：单核细胞增生李斯特菌 脉冲场凝胶电泳 分子分型 

分 类 号：R155.31[医药卫生—营养与食品卫生学] TS207.3[医药卫生—公共卫生与预防医学]