中性纤维素酶β-葡萄糖苷酶基因的克隆表达及酶活测定  

作　　者：薛宇峰 吴金玲[2] 丁悦[2] 

机构地区：[1]辽宁农业展览馆,沈阳110866 [2]沈阳农业大学,沈阳110866

出　　处：《数字技术与应用》2010年第5期173-174,共2页Digital Technology & Application

摘　　要：本实验以一株产胞外中性纤维素酶的菌株芽孢杆菌CY110为研究对象,以麸皮为诱导物发酵获得了纤维素酶的限速酶组分—β-葡萄糖苷酶,酶的总活力和比活力分别达到了10568U和557.4U/mg,将产物分离纯化后经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,在43kDa处得到了单一条带。利用RT-PCR方法从芽孢杆菌CY110中克隆出β-葡萄糖苷酶基因,将此目的基因连接到pBS-T载体后导入大肠杆菌DH5α,测序得到的阳性克隆以载体pET-28a为表达质粒构建出重组质粒并转化到表达菌株BL21(DE3)中。IPTG诱导表达外源基因后测定酶活并对比原始发酵酶活。结果显示:目的基因大小为1398bp,该序列与GenBank中的β-葡萄糖苷酶基因ABQL01000004.1序列相比同源性达到99%,氨基酸序列同源性达到98%,将产物与pET-28a表达载体连接,经双酶切检验,证明原核表达载体构建成功。诱导表达后的β-葡萄糖苷酶比活力为370.21U/mg,高于原始发酵产生的β-葡萄糖苷酶比活力8%。

关 键 词：Β-葡萄糖苷酶 诱导酶 酶活 克隆 表达 

分 类 号：TQ925[轻工技术与工程—发酵工程]