水牛γ-干扰素单克隆抗体的制备及其特性分析  

Preparation and Analysis of Monoclonal Antibodies against Water Buffalo Interferon-gamma

作　　者：徐贤坤[1,2] 熊毅[1] 刘棋[1] 曾宪垠[2] 龙剑明[3] 

机构地区：[1]广西动物疫病预防控制中心,南宁530001 [2]四川农业大学生命理学院,雅安625014 [3]广西大学动物科学技术学院,南宁530005

出　　处：《农业生物技术学报》2010年第3期610-615,共6页Journal of Agricultural Biotechnology

基　　金：广西科技厅科技攻关项目(桂科攻0719004-3F)资助

摘　　要：将原核表达的重组水牛(Bubalus bubalis)γ-干扰素成熟蛋白(rGST-WBIFN-γ)以100μg/只剂量免疫8周龄Balb/c小鼠(Mus musculus),经5次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,以rHIS-WB-IFN-γ和rGST-WBIFN-γ蛋白共同作为检测抗原进行间接ELISA检测,筛选并最终得到了2株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株(分别命名为1E4和4A11),分泌抗体亚型均为IgG1型,轻链均为κ链。Western-blot-ting检测显示:2株单克隆抗体与原核表达的rWBIFN-γ蛋白均能特异性结合,具有良好的免疫反应原性。BALB/c mice （Mus musculus） were immunized five times by purified recombinant buffalo （Bubalus bubalis） interferon-gamma （rGST-WBIFN-γ） expressed in Escherichia coli BL21 （DE3） at a dose of 100 μg per mice. Murine myeloma sp2/0 cells were fused with splenocytes from the immunized mice. An indirect ELISA using recombinant protein rHIS-WBIFN-γ and rGST-WBIFN-γ as coating antigen were used to screen antibody-producing hybridomas. Two hybridomas cell stains could steadily produce monoclonal antibody （McAbs） after 4 cycles of subcloning.Both McAbs blonging to IgG1 isotype and κ chain,showed positive reaction to rHIS-WBIFN-γ in western blotting.

关 键 词：Γ-干扰素 水牛 单克隆抗体 

分 类 号：S852.43[农业科学—基础兽医学]