聚乙烯亚胺介导NIH-3T3细胞体外转染pEGFP-N1系统优化  

Optimization of in vitro transfecting NIH-3T3 cells with pEGFP-N1 by polyethylenimine

作　　者：丁爱军[1] 任丽伟[1] 许峰[1] 秦玉蓉[1] 傅德智[1] 李碧春[1] 

机构地区：[1]扬州大学动物科学与技术学院动物遗传育种与繁殖实验室,江苏扬州225009

出　　处：《第三军医大学学报》2010年第16期1712-1715,共4页Journal of Third Military Medical University

基　　金：国家高技术研究发展计划(863计划;2007AA100504);国家自然科学基金(30871791);江苏省高校自然科学重大基础研究项目(08KJA230001);江苏省六大人才高峰项目(2010)~~

摘　　要：目的优化聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导的细胞转染以提高目的基因在细胞中的表达强度。方法根据PEI/DNA不同的质量比(0:1、0.5:1、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1)利用凝胶阻滞分析结合的情况;不同质量比PEI/DNA形成的复合物对NIH-3T3细胞的转染通过细胞表达强度获得最佳PEI/DNA质量比;比较实验组1(PEI/DNA质量比2:1)、实验组2(重复PEI/DNA质量比2:1)及实验组3(PEI/DNA质量比4:2)3种转染方案,探讨重复转染的方法是否提高细胞表达强度。结果①通过凝胶阻滞分析PEI/DNA能够稳定结合的质量比是1:1～10:1;②PEI/DNA复合物对NIH-3T3细胞进行转染,其荧光表达强度当PEI/DNA(质量比)≤2时随着PEI的增加而提高,当PEI/DNA(质量比)>2时,荧光表达强度反而降低;③采用重复转染的方法实验组2细胞荧光表达强度(24.08±0.28)%明显高于实验组1(8.97±4.02)%和实验组3(14.24±2.68)%(P<0.05)。结论在PEI/DNA(质量比)=2的条件下,PEI/DNA复合物转化NIH-3T3细胞的效果比较理想,重复转染可以提高细胞转染后荧光表达强度。Objective To optimize the system of transfecting cells with target genes by polyethylenimine （PEI） so as to increase cell expression.Methods On the basis of PEI/DNA at different mass ratios （0：1,0.5：1,1：1,2：1,3：1,4：1,5：1,6：1,7：1,8：1,9：1,and 10：1）,the ability of PEI to combine and protect DNA was investigated by agarose gel electrophoresis retardation assay.Cell fluorescence expression was analyzed after transfecting PEI/DNA complexes at different mass ratios into NIH-3T3 cells in order to obtain the optimal mass ratio of PEI/DNA complex.Comparison of repeat PEI：DNA ratio of 2：1 （w/w）,PEI：DNA ratios of 2：1 and 4：2 （w/w） of 3 experiment groups of transfection.Repeating transfection was used ot increase cell expression.Results Agarose gel electrophoresis retardation assay indicated that the quality ratios of forming stable PEI/DNA complexes was in a range of 1：1 to 10：1.Cell expression of PEI/DNA was improved with the increase of PEI：DNA mass ratios and the amount reached the highest at PEI：DNA ratio of 2：1 （w/w）,but began to decrease at PEI：DNA mass ratio greater than 2.By the way of repeat transfection,cell expression in the test group （PEI：DNA ratios of 2：1） was significantly higher than the other test groups （P0.05）.Conclusion Cell expression reaches the highest at PEI：DNA ratio of 2：1 （w/w） and can be increased by repeating transfection.

关 键 词：聚乙烯亚胺 细胞转染 表达强度 

分 类 号：R394.33[医药卫生—医学遗传学] R394.2[医药卫生—基础医学]