转甲状腺素蛋白基因在酵母中的表达  

Expression of Transthyretin Gene in Yeast Pichia pastoris

作　　者：程颖[1] 高卜渝[2] 宋大新[1] 袁汉英[2] 陈永青[1] 李育阳[2] 柳湘[3] 田培坤[3] 顾健人[3] 

机构地区：[1]复旦大学微生物系 [2]复旦大学遗传学研究所遗传工程国家重点实验室 [3]上海市肿瘤研究所,上海200031

出　　处：《生物工程学报》1999年第4期428-433,共6页Chinese Journal of Biotechnology

摘　　要：用限制酶 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ 将含人 Ｔ Ｔ Ｒ 基因的 Ｄ Ｎ Ａ 片段（ 约４９３ｂｐ） 从质粒ｐ Ｓ Ｋ Ｔ Ｔ Ｒ 上切下后并插入到分泌型载体ｐ Ｈ Ｉ Ｌ Ｓ Ｉ 的 Ｂａ ｍ Ｈ Ｉ 位点上，经酶切鉴定重组质粒ｐ Ｈ Ｉ Ｌ Ｓ Ｉ Ｔ Ｔ Ｒ 上的 Ｔ Ｔ Ｒ 基因插入方向正确。将ｐ Ｈ Ｉ Ｌ Ｓ Ｉ Ｔ Ｔ Ｒ Ｄ Ｎ Ａ 用 Ｂｇｌ Ｉ Ｉ 酶切后，转入真核表达系统———毕赤氏酵母。得到的转化子经摇瓶发酵，上清液用１５ ％ Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 检测，有 Ｔ Ｔ Ｒ Ｆ 的表达。经 Ｄ Ｅ Ａ Ｅ Ｓｅｐｈｅｒｏｓｅ Ｆ． Ｆ 离子交换柱和 Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ Ｓ２００ 分子筛层析，得到纯化的 Ｔ Ｔ Ｒ Ｆ。体外实验表明 Ｔ Ｔ Ｒ ＦPlasmid pSK TTR was digested by Bam HI and the DNA fragment containing TTR gene (Transthyretin) was cloned into the Bam HI site of secretion vector pHIL SI TTR.In right orientation and frame.After the recombinant plasmid pHIL SI TTR was digested by Bgl II,the larger fragment of it was transformed into yeast Pichia pastoris. The SDS PAGE analysis showed that the yeast transformants could express and secret TTRF.The pure TTRF could be obtained by DEAE Sepherose F.F.chromatography and SephacrylS 200 chromatography.The vitro test showed inhibition of the growth of hepatoma cells by TTRF obtained from our experiments.

关 键 词：转甲状腺素蛋白 分泌型载体 毕赤氏酵母 肝癌细胞 

分 类 号：Q785[生物学—分子生物学] Q513