靶向活化T细胞核因子1基因的shRNA质粒表达载体的构建  

作　　者：武珊珊[1] 刘吉福[1] 

机构地区：[1]北京军区总医院胸外科,100700

出　　处：《肿瘤研究与临床》2012年第3期189-191,共3页Cancer Research and Clinic

基　　金：国家自然科学基金（30872551）

摘　　要：目的利用pRNAT—U6．1／Neo质粒构建靶向NFAT1基因的3个shRNA，为下一步探索肺癌基因治疗的RNA干扰途径奠定基础。方法设计3对shRNA（NFAT1-sh-1、NFAT1-sh-2、NFAT1-sh-3），以人类基因同源性差的无关序列（NFAT1-sh—NC）作为阴性对照。筛选与人类其他基因同源性小、特异性针对目的基因的siRNA。合成并克隆至带有u6启动子的pRNAT—U6．1／Neo质粒中，构建质粒表达载体，通过凝胶电泳鉴定后转化至大肠杆菌中进行培养，并提取质粒进行DNA测序鉴定。结果成功构建和筛选出靶向NFAT1基因的3对shRNA质粒表达载体，GC比例为40％-55％。结论构建的3个靶向NFAT1基因shRNA质粒表达载体有助于肺癌靶向基因治疗RNA干扰的研究。为筛选有效的基因干扰载体，以及对荷瘤肺癌裸鼠靶向RNAi抗肿瘤细胞生长的研究鉴定了基础。

关 键 词：RNA干扰 短发夹RNA SHRNA 质粒构建 活化T细胞核因子 

分 类 号：R734.2[医药卫生—肿瘤]