蛇毒血凝酶纯度分析方法研究  

Study on the purity analysis method of hemocoagulase

作　　者：程速远[1,2] 王超众[3,4] 李晶[2] 梁成罡[2] 王凤山[1] 

机构地区：[1]山东大学药学院生化与生物技术药物研究所,济南250012 [2]中国食品药品检定研究院卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室,北京100050 [3]齐齐哈尔市药品检验所,齐齐哈尔161006 [4]沈阳药科大学,沈阳110016

出　　处：《药物分析杂志》2012年第8期1398-1401,共4页Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis

基　　金：中国食品药品检定研究院中青年基金项目资助(2010A7)

摘　　要：目的:建立蛇毒血凝酶纯度测定方法。方法:分别采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)和等电聚焦法(IEF),对凝胶考染并扫描;采用体积排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC),使用TSK G3000SW(7.8 mm×300 mm)凝胶柱,流动相为55 mmol.L-1柠檬酸钠-0.01%Tween 80溶液;流速0.5 mL.min-1,检测波长280 nm;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),使用C8Vydac(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%三氟乙酸溶液(A)-含0.1%三氟乙酸的90%乙腈(B),梯度洗脱,流速0.8 mL.min-1,;柱温为45℃,检测波长:280 nm。结果:4种方法测得蛇毒血凝酶的纯度分别为89.3%,88.5%,95.4%,87.4%。结论:对于蛇毒血凝酶纯度测定,非还原SDS-PAGE、IEF及RP-HPLC法均可准确地反映其样品纯度。Objective：To establish a method to determine the purity of Haemocoagulase（HC）.Methods：SDS-polyacrylamide gel electrophoresis（SDS-PAGE）,isoelectric focusing（IEF）,size exclusion column-HPLC（SEC-HPLC）and reversed phase-HPLC（RP-HPLC） were used respectively to determine the purity of HCA.TSK G3000SW（7.8 mm×300 mm） column was applied for SEC-HPLC,using 55 mmol·L-1 citric acid sodium-0.01% Tween 80 solution as the mobile phase the flow rate of 0.5 mL·min-1,the detection wavelength at 280 nm;C8 Vydac（4.6 mm×250 mm,5 μm） column was employed for RP-HPLC,using 0.1% triflouroacetic acid（TFA） as the mobile phase A,and 90% acetonitrile containing 0.1% TFA as the mobile phrase B,at the flow rate of 0.8 mL·min-1,the detection wavelength 280 nm.Results：The results of purity detected by the four methods were 89.3%,88.5%,95.4% and 87.4%,respectively.Conclusion：Except SEC-HPLC,the other three methods were feasible to determine the purity of HCA.

关 键 词：蛇毒血凝酶 纯度测定 非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 等点聚焦 体积排阻高效液相色谱 

分 类 号：R917[医药卫生—药物分析学]