白藜芦醇在酿酒酵母中的组合表达  

Combinatorial expression of resveratrol in engineered Saccharomyces cerevisiae

作　　者：孙萍[1] 郭丽琼[1] 梁景龙[1] 林俊芳[1] 黄晓燕[1] 黄佳俊[1] 

机构地区：[1]华南农业大学食品学院,广东广州510640

出　　处：《食品与发酵工业》2013年第8期7-12,共6页Food and Fermentation Industries

基　　金：国家自然科学基金项目(No.31272217;No.31071837)

摘　　要：将克隆自拟南芥的4cl基因和巨峰葡萄的rs基因,利用降落重叠延伸PCR的方法,成功构建了含有G418抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42K-4CL以及含有潮霉素抗性筛选标记的酵母表达载体pRS42H-RS。采用LiAc/SS carrier DNA/PEG法将含有目的基因的2个载体共同转化至酿酒酵母工业菌株EC1118中,通过PCR及酶切鉴定等方法验证重组工程菌。以对香豆酸为底物,将获得的酿酒酵母工程菌于YPD液体培养基中发酵(25℃,150 r/min,96 h),发酵液用乙酸乙酯抽提后采用高效液相色谱(HPLC)法进行检测,其结果显示发酵产物中白藜芦醇的含量为0.78 mg/L。这表明,拟南芥的4cl基因与巨峰葡萄的rs基因在酿酒酵母工程菌中成功得到了表达,并且表达产物利用对香豆酸为前体物质合成了目标产物白藜芦醇。该研究为进一步实现白藜芦醇在酵母中的工业化生产奠定了基础。The 4-coumarate： coenzyme A ligase gene （4CL） from Arabidopsis thaliana and resveratrol synthase gene （RS） from Vitis vinifera were cloned into the 2^-based muhicopy drug resistance marker plasmids pRS42K （ G418 resistance） and pRS42H （ hygromycin resistance）. The recombinant plasmids were transformed into EC1118 cells using the LiAc/SS carrier DNA/PEG method. A shaking flask fermentation （25 ℃ , 150 r/rain） of the engi- neered strain in YPD medium supplemented with 0. 1 mmol/L p-coumarate every 24 h was performed. Under these conditions, this strain produced 0.78 mg/L resveratrol within 96 h. The result showed that the A. thaliana 4CL gene and V. vinifera RS gene were expressed in this recombinant strain to produce resveratrol from p-coumarate successful- ly.

关 键 词：白藜芦醇 酿酒酵母 组合表达 4-香豆酰辅酶A连接酶 白藜芦醇合酶 

分 类 号：Q78[生物学—分子生物学]