正交优化乙醛脱氢酶2基因多态性PCR体系  

Optimization for PCR System of ALDH2 Polymorphism Using Orthogonal Design

作　　者：吴珂[1] 蔡泓敏[1] 刘震[1] 赵冠人[1] 冯端浩[1] 

机构地区：[1]解放军第309医院药剂科,北京100091

出　　处：《中国药物警戒》2013年第11期643-646,共4页Chinese Journal of Pharmacovigilance

摘　　要：目的建立通用的ALDH2基因PCR反应体系,筛选出各反应因素的最佳水平。方法采用正交设计L16(45)在4个水平5个因素(Taq酶、引物、Mg2+、dNTP和模板DNA)对ALDH2基因PCR反应体系进行实验,两次结果分别用统计软件MINITAB进行分析,利用梯度PCR确定引物最佳退火温度。结果 ALDH2基因PCR反应的最佳反应条件为:为25 L体系中包含:Mg2+(25 mM)2.5 L、dNTPs(2.5 mM)2.0 L、引物上游和引物下游各(2.5 M)3.0 L、模板DNA 3.0μL、10×PCR buffer 2.5 L、Taq酶1.5U,退火温度为60℃。结论这一通用PCR反应条件的建立为实现ALDH2基因多态性检测建立了基础。Objective To develop the most suitable PCR system for ALDH2. Methods The orthogonal design was used to optimize PCR reaction system for ALDH2 with five factors（Taq DNA polymerase, Mg2＋, DNA template, dNTPs and primers） at four levels respectively. Results The most suitable PCR system for ALDH2 was established, namely 25μL reaction system containing 2.5μL Mg2＋（25mNl）, 2.0μL dNTPs mix（2.SmM）, 3.0μL primers（2.SmM）, 3.0μL DNA （-30ng）, 2.5μLof 10xPCR buffer, 1.5U of Taq DNA polymerase. The optimal annealing temperature was 60℃ based on gradient PCR. Concusion This unive：sal system provided a standardizing program for the ALDH2 gene polymorphism.

关 键 词：ALDH2 基因多态性 正交设计 PCR体系 

分 类 号：R394.6[医药卫生—医学遗传学]