结核分枝杆菌多价核酸疫苗的构建及免疫原性  

作　　者：蔡宏[1] 潘怡[1] 朱玉贤[1] 李国利[2] 庄玉辉[2] 

机构地区：[1]北京大学蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室,北京100871 [2]解放军第三O九医院结核病研究中心,北京100091

出　　处：《科学通报》2002年第13期966-971,共6页Chinese Science Bulletin

基　　金：本工作为国家高技术研究发展计划资助项目(批准号:2001AA213141).

摘　　要：将编码结核分枝杆菌MPT-64,Ag85B和ESAT-6分泌蛋白的结构基因或包括信号肽的全基因序列定向克隆到真核表达载体pJW4303中,转化到TOP10大肠杆菌,提取质粒DNA,经限制性核酸内切酶鉴定及序列分析证实含有正确的上述3种分泌蛋白的结构基因（包括信号肽）全序列.用脂质体介导法将重组表达质粒导入COS7细胞内并进行瞬时表达,收集表达细胞或浓缩上清液,12％或15％的 SDS-PAGE电泳分离,用结核杆菌特异性抗体进行免疫印迹杂交,证明上述3种重组质粒能在哺乳动物细胞中表达出特异蛋白.3种重组表达质粒同时肌注免疫小鼠21d后,Ag85B抗体的平均滴度即达到 1:3200,第2次免疫21d后达到1:102400.MPT-64抗体的平均滴度在首免21d后为1:50.第2次免疫21后为1:200.两次免疫21d后均未检测到ESAT-6的特异性抗体.三免21后Ag85B的特异性细胞因子γ-干扰素的浓度为110pg/mL;而 MPT-64和ESAT-6的γ-干扰素浓度未检测到.实验在国内首次用结核杆菌多价DNA疫苗对小鼠进行了免疫实验,二免后的抗体水平已达到或超过国内外已报道的单价苗最高抗体水平,表明多价核酸疫苗和分泌型蛋白载体有利于增强疫苗的保护性应答.

关 键 词：结核分枝杆菌 分泌蛋白抗原 多价核酸疫苗 免疫原性 细胞应答 结核病 体液免疫应答 

分 类 号：R392[医药卫生—免疫学]