三氧化二砷对3种神经母细胞瘤细胞株的诱导作用  

The unduced effect of arsenic trioxide in different types of neuroblastoma cell lines

作　　者：吴伟[1] 邵静波[2] 周君梅[3] 李玲玲[3] 吕志葆[1] 

机构地区：[1]上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院普外科,200040 [2]上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院血液科,200040 [3]上海交通大学附属儿童医院上海市儿童医院中心实验室,200040

出　　处：《中华实用儿科临床杂志》2015年第15期1164-1167,共4页Chinese Journal of Applied Clinical Pediatrics

基　　金：上海市科学技术委员会科研计划课题（12411952405）;上海市科学技术委员会样本库建设平台项目（12DZ2295006）

摘　　要：目的体外观察不同浓度三氧化二砷（As2O3）在不同的诱导时间作用下对3种神经母细胞瘤（NB）细胞株分化与凋亡的作用。方法采用不同浓度（0、1、3、5、7μmol,／L）的As2O3诱导3组NB细胞株SK-N-SH、SK-N-BE2、SH-SY5Y，在同等条件下分别培养24、48、72h。采用荧光原位杂交技术、流式细胞术、细胞增殖毒性检测法，检测As2O3对3种NB细胞株的细胞生物学影响。结果5μmol／L As2O3诱导72h后，SK-N-BE2的MYCN基因扩增数量明显减少；相较于低浓度（1μmol／L）As2O3，随着浓度的增加，3组细胞增殖活力逐渐降低，SH-SYSY：24h（chisq=9．6667，P〈0．05），48h（chisq=9．6667，P〈0．05），72h（chisq：9．5128，P〈0．05）；SK-N-SH：24h（chisq=10．3846，P〈0．05，），48h（chisq=8．6410，P〈0．05），72h（chisq=9．4615，P〈0．05），SK-N-BE2：24h（chisq=8．4359，P〈0．05），48h（chisq=8．6410，P〈0．05），72h（chisq=9．5455，P〈0．05）；流式细胞仪检测结果显示，随着As：O，浓度的增加，与空白组相比，细胞早晚期凋亡率明显增加，凋亡率分别为1．6％（0μmol／L），3．8％（1μmol／L），6．1％（3μmol／L），10．4％（5μmol／L），40．2％（7μmol／L）；细胞周期中G2／M期延长，细胞分裂受到抑制。结论1．As2O3对NB细胞株具有诱导凋亡，抑制细胞增殖的作用，呈剂量依赖性，不同类型的NB细胞株对As2O3敏感程度不一。2．SK-N-BE2细胞在As2O3诱导后，扩增的MYCN基因具有转阴趋势。3．经As2O3诱导后，3组NB细胞的细胞周期在S期及G2／M期受到阻滞，细胞核酸复制及细胞分裂受到抑制。Objective To identify the effect of arsenic trioxide （ As2 03 ） on the differentiation and apoptosis of different types of neuroblastoma（NB） cell lines. Methods The cell lines [ SK - N - SH, SK - N - BE2, SH - SY5 Y ] were induced with different concentrations （ 0 μmol/L, 1 p, mol/L, 3 μmol/L, 5 μmol/L and 7 /xmol/L） of arsenic trioxide for 24 h ,48 h ,72 h under the same conditions. The expression of MYCN gene was examined by fluorescence in situ hybridization assay in SK - N - BE2, cell proliferation, cell cycle and cell apoptosis were detected with cell counting kit -8 （CCK- 8 ） assay and flow cytometry. Results 5 μmol/L of As203 inhibited the expression of MYCN gene in SK - N - BE2 ; CCK - 8 assay indicated that As2 03 inhibited the proliferation of NB cell in a dose - and time - depen- dent manner,the cell proliferation was significantly suppressed compared with the low concentration （1 μ mol/L） after treated with As2 03 by 1 μmol/L, 3 μmol/L,5 μmol/L and 7 μmol/L in 24 h,48 h and 72 h, SH - SY5 Y ： 24 h （ chisq = 9. 666 7, P 〈 0.05 ） ,48 h （ chisq = 9. 666 7, P 〈 0.05 ）, 72 h （ chisq = 9.512 8, P 〈 0.05 ） ; SK - N - SH, 24 h （ chisq = 10.38,P 〈0. 054 6）,48 h（chisq =8. 641 0,P 〈0.05） ,72 h（chisq =9. 461 5,P 〈0.05） ;SK -N -BE2：24 h （ chisq = 8. 435 9,P 〈 0.05 ） ,48 h （ chisq = 8. 641 0,P 〈 0. 05 ） ,72 h （ chisq = 9. 545 5, P 〈 0.05 ） ; compared with the control group, the As203 -treated cells showed increased apoptosis percentage, with the percentage of 1.6% （0 μmol/L） ,3.8% （1 μmol/L） ,6. 1% （3 μmol/L） ,10.4% （5 μmol/L） ,40.2% （7 μmol/L） ; the cell cycle was ar- rested at G2/M phase, which prevented cell division. Conclusions （1）As203 play an important role on the NB ceils proliferation, apoptosis which were dose -and time -dependent manner. （2）As2 03 can inhibit the expression of MYCN gene. （3）As2 03 also could block NB cell cycle at S and G2/M, and inhibit the cell nucleus replication

关 键 词：神经母细胞瘤 三氧化二砷 细胞周期 MYCN基因 

分 类 号：R73-3[医药卫生—肿瘤]